布魯菌病陽(yáng)性、陰性血清、布魯菌虎紅平板凝集試驗(yàn)抗原、布魯菌試管凝集試驗(yàn)抗原均由中國(guó)獸醫(yī)藥品監(jiān)察所提供，牛、羊、豬血清樣品由地區(qū)動(dòng)物疾控中心采集，病原學(xué)樣品由縣（市）獸醫(yī)站提供。布病平板凝集抗原，批號(hào)201102、201202，201302，布病平板凝集陰性血清，批號(hào)201101；布病平板凝集陽(yáng)性血清，批號(hào)：201001。

     筆者于2011-2013年在吐魯番地區(qū)所轄兩縣一市的27個(gè)鄉(xiāng)（鎮(zhèn)）牛、羊、豬養(yǎng)殖密集地，分別對(duì)商品代養(yǎng)場(chǎng)、散養(yǎng)戶、活畜交易市場(chǎng)和屠宰場(chǎng)動(dòng)物隨機(jī)采集血清樣品。共采集牛血清樣品4710頭份，羊血清樣品4354頭份，豬血清樣品190頭份。家畜病原學(xué)樣品主要來自吐魯番市的亞爾鄉(xiāng)（商品代養(yǎng)場(chǎng)）、艾丁湖鄉(xiāng)、恰特卡勒鄉(xiāng)；鄯善縣辟展鄉(xiāng)、魯克沁鎮(zhèn)、城鎮(zhèn)、東巴扎鄉(xiāng)；托克遜縣的伊拉湖、夏鄉(xiāng)、郭勒布依鄉(xiāng)（均為商品代養(yǎng)場(chǎng)）。樣品取自非正常羊流產(chǎn)胎兒胃液以及肝臟、脾臟。流產(chǎn)母畜年齡在2～6歲之間，均沒有接種布魯氏桿菌疫苗記錄。產(chǎn)羔數(shù)在1～3胎之間，以3胎為多。流產(chǎn)母羊品種繁雜，主要有山羊和本地土種羊等,共采集樣品120份。

     培養(yǎng)皿、高壓鍋、接種環(huán)、鑷子、手術(shù)剪刀、酒精燈、生化培養(yǎng)箱、低溫冰箱、試管架、75%酒精、95%酒精、3%來蘇爾、Tryrtose、胰蛋白、瓊脂粉、氯化鈉、葡萄糖。工具與試劑均由實(shí)驗(yàn)室提供。

     在滅菌潔凈的玻璃板片上，用移液槍分別吸取被檢血清30μL與虎紅平板凝集抗原3OμL混合均勻，在室溫(20℃)4min內(nèi)記錄反應(yīng)結(jié)果。同時(shí)以陽(yáng)、陰性血清作對(duì)照。被檢血清出現(xiàn)任何程度顆粒狀或絮狀的凝集現(xiàn)象均判為陽(yáng)性，完全不凝集的判為陰性，無可疑反應(yīng)。初篩陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為虎紅平板凝集實(shí)驗(yàn)(RBPT)陽(yáng)性或疑似；血清學(xué)檢查方法陽(yáng)性標(biāo)準(zhǔn)為試管凝集實(shí)驗(yàn)(sAT)陽(yáng)性。

     本試驗(yàn)按《家畜布氏桿菌病試管凝集反應(yīng)技術(shù)操作規(guī)程及判定標(biāo)準(zhǔn)》進(jìn)行。首先稀釋血清，羊血清稀釋度為1∶12.5、1∶25、1∶50和1∶100，牛血清樣品稀釋度為1∶25、1∶50、1∶100和1∶200。加入等量稀釋后的抗原，混勻，則血清稀釋度依次為1∶25、l∶50、l∶100、1∶200；1∶50、1∶100、1∶200和1∶400。同時(shí)做陰性對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照及抗原對(duì)照，并配制比濁管。將全部試管、對(duì)照管及比濁管充分震蕩后置37℃恒溫箱中作用20～22h，然后以比濁管為標(biāo)準(zhǔn)判定結(jié)果。如果試管的底部出現(xiàn)點(diǎn)狀或圓盤狀沉淀，則不需比較清亮度。如果試管的底部出現(xiàn)倒傘狀沉淀，則需要用比濁管比較其清亮度。如果其清亮度在1∶50達(dá)++以上，l∶100達(dá)++以上，則判定為陽(yáng)性。

     (1)培養(yǎng)基的配置。按照配置標(biāo)準(zhǔn)稱取胰蛋白40g、Tryrtose40g、氯化納10g、葡萄糖2g,融于2L水中，攪拌充分溶解后高壓滅菌20min。pH值控制在6.8～7.0之間。

     (2)培養(yǎng)皿準(zhǔn)備。將滅菌的培養(yǎng)皿放入超凈工作臺(tái)內(nèi)，等滅菌培養(yǎng)基溫度適宜時(shí)將其倒入培養(yǎng)皿中，每個(gè)培養(yǎng)皿最少倒置20mL培養(yǎng)基。液體傾倒時(shí)緩慢轉(zhuǎn)圈移動(dòng)培養(yǎng)皿，使液體均勻覆蓋整個(gè)器皿底部，不要產(chǎn)生氣泡并注意無菌操作。等培養(yǎng)皿完全涼下來后，倒置放于37℃冰箱，無污染觀察48h。

     (3)病料接種前準(zhǔn)備。3%來蘇爾消毒液、接種環(huán)、鑷子、手術(shù)剪刀、酒精燈等器具，試驗(yàn)開始前提前放入無菌間并紫外線滅菌30min，滅菌完等20～30min后人員再進(jìn)入，以免紫外線灼傷皮膚。人員進(jìn)入要穿一次性防護(hù)衣，口罩，帽子，鞋套、乳膠手套。

     (4)病料接種。接種前將培養(yǎng)皿平均劃分成3份，按照接種病料種類標(biāo)注。接種時(shí)一手拿培養(yǎng)皿，一手拿接種環(huán)，將酒精燈置于兩者之間，用拇指和食指將培養(yǎng)皿向上打開15°左右，將采集的病料用消毒的剪刀切開，用接種環(huán)采集新鮮切面涂瓊脂平板。接種時(shí)采用之字形，不要反復(fù)涂抹，會(huì)造成污染。一份樣品接種完成以后在培養(yǎng)皿標(biāo)注接種日期、時(shí)間、樣品號(hào)、樣品名稱。接種完成后將培養(yǎng)皿正放在37℃恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24h后反放培養(yǎng)皿。分別在培養(yǎng)24h、36h、48h、72h、84h、96h時(shí)，觀察菌類生長(zhǎng)情況。其余樣品方法如上，同時(shí)做陰陽(yáng)性對(duì)照。

     若在培養(yǎng)72h后有菌落長(zhǎng)出，且呈現(xiàn)針尖大小、透明狀，應(yīng)進(jìn)一步做染色鑒定。隨機(jī)挑取單個(gè)菌種接種玻片，火焰固定或自然干燥固定，加結(jié)晶紫染色1min,清水沖去；加碘液1min,水洗；加95%乙醇搖勻10～30s,水洗；加沙黃復(fù)染30s,水洗。顯微鏡下觀察，同時(shí)做陰陽(yáng)性對(duì)照。

     接種病料在12h觀察時(shí)無任何變化，24h觀察有極個(gè)別雜菌生長(zhǎng)，數(shù)量較少；36h、48h、60h、72h、84h、96h觀察，無菌落生長(zhǎng)，均顯示陰性。

     將培養(yǎng)皿中72h生長(zhǎng)的菌落染色觀察，顯微鏡下沒有觀察到布魯氏桿菌,結(jié)果顯示陰性。陽(yáng)性、陰性對(duì)照成立。

     吐魯番地區(qū)中心實(shí)驗(yàn)室2011-2013年對(duì)吐魯番地區(qū)牛、奶牛、羊和豬等易感動(dòng)物采用總體隨機(jī)抽樣的方法，測(cè)定商品代養(yǎng)場(chǎng)、散養(yǎng)戶、活畜交易市場(chǎng)、屠宰場(chǎng)血清學(xué)樣品和家畜非正常流產(chǎn)胎兒病原學(xué)監(jiān)測(cè)結(jié)果均為陰性。總體來看，雖然吐魯番地區(qū)近幾年布病監(jiān)測(cè)結(jié)果較好，但全疆布病總體形勢(shì)呈上升趨勢(shì)。再加上吐魯番地區(qū)畜牧業(yè)主要以牛羊育肥為主,牲畜大進(jìn)大出、調(diào)運(yùn)頻繁，動(dòng)物疫病風(fēng)險(xiǎn)較大。尤其是布魯氏菌病等慢性疾病不在國(guó)家強(qiáng)制免疫范圍內(nèi)，加之個(gè)體養(yǎng)殖戶的不斷增多，市場(chǎng)交易頻繁，牲畜的流通加快，檢疫、免疫、病畜的凈化等措施跟不上，有可能致使布病死灰復(fù)燃，給畜牧業(yè)和人類健康帶來嚴(yán)重危害，使吐魯番地區(qū)“兩病”防控形勢(shì)也日趨嚴(yán)峻。布病防治工作要嚴(yán)格按照《國(guó)家中長(zhǎng)期動(dòng)物疫病防治規(guī)劃（2012-2020年）》要求，按照人畜同步、分區(qū)防治、分類指導(dǎo)的原則，推動(dòng)實(shí)施本地區(qū)布病防治計(jì)劃，并做好監(jiān)測(cè)、撲殺和無害化處理工作。

（新疆吐魯番地區(qū)動(dòng)物疾病控制與診斷中心，祁巧芬）