“瘦肉精”是一類(lèi)藥物的統(tǒng)稱(chēng)，主要是腎上腺類(lèi)、β激動(dòng)劑、β-興奮劑。我國(guó)所說(shuō)的“瘦肉精”是指克倫特羅，對(duì)大多數(shù)動(dòng)物具有促生長(zhǎng)作用，增加動(dòng)物的瘦肉量，提高飼料轉(zhuǎn)化率，使動(dòng)物及其肉品提早上市而降低成本、增加利潤(rùn)。據(jù)報(bào)道，使用“瘦肉精”的生豬平均每100kg可多獲利40～60元。但人食用了含有較高殘留量的“瘦肉精”動(dòng)物產(chǎn)品后，會(huì)出現(xiàn)心跳加快、頭暈、心悸、呼吸困難、肌肉震顫、頭痛等中毒癥狀。同時(shí)“瘦肉精”還可通過(guò)胎盤(pán)屏障進(jìn)入胎兒體內(nèi)產(chǎn)生蓄積，從而對(duì)子代產(chǎn)生嚴(yán)重的危害。“瘦肉精”殘留對(duì)人體危害的典型案例就是西班牙克倫特羅牛肝中毒事件。我國(guó)政府早在1997年《關(guān)于嚴(yán)禁非法使用獸藥的通知》(農(nóng)牧發(fā)【1997】3號(hào))文件中明確禁止“瘦肉精”在飼料和畜牧生產(chǎn)中使用。然而，近幾年國(guó)內(nèi)屢屢出現(xiàn)非法使用“瘦肉精”飼喂食豬、羊、牛等牲畜事件，嚴(yán)重危害了社會(huì)公共衛(wèi)生安全。在對(duì)于畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)控過(guò)程中，檢測(cè)則成為最重要的環(huán)節(jié)之一，目前常用“瘦肉精”檢測(cè)方法主要有四種，即膠體金免疫層析法、酶聯(lián)免疫吸附法、高效液相色譜法及色譜質(zhì)譜串聯(lián)法。這四種檢測(cè)方法在實(shí)際應(yīng)用中各有其優(yōu)缺點(diǎn)，本文結(jié)合“瘦肉精”監(jiān)管工作實(shí)際，予以對(duì)比分析。
1膠體金免疫層析法(GICT)
膠體金免疫層析法是以膠體金作為示蹤標(biāo)志物應(yīng)用于抗原抗體的一種新型的免疫標(biāo)記技術(shù)。檢測(cè)卡含有被事先固定于NC膜檢測(cè)區(qū)(T)的抗原和控制區(qū)(C)Ⅱ抗以及固定于結(jié)合墊上的金標(biāo)抗體。當(dāng)樣品中的“瘦肉精”抗原在流動(dòng)的過(guò)程中與膠體金標(biāo)記的抗體結(jié)合，阻止了抗體和NC膜T線(xiàn)上的抗原結(jié)合，從而導(dǎo)致檢測(cè)線(xiàn)顏色深淺的變化。當(dāng)樣本中沒(méi)有“瘦肉精”或“瘦肉精”濃度低于檢測(cè)限時(shí)，T線(xiàn)顯色，檢測(cè)結(jié)果為陰性：當(dāng)樣本中的“瘦肉精”濃度等于或高于檢測(cè)限時(shí)，T線(xiàn)不顯色，檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性；而無(wú)論樣本中是否含有“瘦肉精”，C線(xiàn)都會(huì)顯色，以示檢測(cè)有效。該檢測(cè)方法是一種快速定性的檢測(cè)方法，其特點(diǎn)是成本低，檢測(cè)流程簡(jiǎn)單，不需要儀器設(shè)備，使用便捷，結(jié)果易于判讀，可以用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)，因此基層監(jiān)督檢測(cè)人員一般采用該檢測(cè)法對(duì)活體動(dòng)物進(jìn)行大量篩查，檢測(cè)樣本一般為尿液或血液。但該檢測(cè)方法的靈敏度低，檢測(cè)限相對(duì)較高，約3ng/mL，檢測(cè)結(jié)果易受人為、環(huán)境等因素的影響而存在一定的誤差，實(shí)驗(yàn)重復(fù)性差，檢測(cè)結(jié)果只能作為一種初步判定，如出現(xiàn)陽(yáng)性樣品，需按照國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的法定程序進(jìn)一步確證。
2酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)
酶聯(lián)免疫吸附法是采用抗原與抗體的特異性反應(yīng)將待測(cè)物與酶連接，然后通過(guò)酶與底物產(chǎn)生顏色反應(yīng)的一種免疫測(cè)定技術(shù)。ELISA檢測(cè)方法有雙抗體夾心法測(cè)抗原、間接法測(cè)抗體、競(jìng)爭(zhēng)法測(cè)抗體等，其基本原理是“瘦肉精”抗體或者抗原以物理性吸附于固象載體表面，并保持其免疫活性，抗體或抗原可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，此種酶結(jié)合物仍保持其免疫學(xué)和酶學(xué)活性。加入待測(cè)樣品中的“瘦肉精”與酶結(jié)合物競(jìng)爭(zhēng)性與固相載體上的“瘦肉精”抗體結(jié)合，酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或抗體結(jié)合后，洗滌后加底物，根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判斷是否有免疫反應(yīng)的存在，若待測(cè)樣本中“瘦肉精”含量高，則被結(jié)合的酶結(jié)合物少，顯色就淺。加入終止液后在酶標(biāo)儀上450nm波長(zhǎng)處讀取結(jié)果測(cè)定樣品中“瘦肉精”的含量。該檢測(cè)方法操作方法簡(jiǎn)單，對(duì)設(shè)備的要求不高，成本較低，靈敏度較高，檢測(cè)限較低，一般尿液0.1μg/L，肉類(lèi)0.3μg/kg～0.5μg/kg，適用于大批量樣品的初步篩查，但不適用于現(xiàn)場(chǎng)檢測(cè)。此方法雖然靈敏度較高，但特異性較高效液相色譜法差，不能同時(shí)分析多種成分，對(duì)有相似結(jié)構(gòu)的物質(zhì)具有一定的交叉反應(yīng)，易出現(xiàn)假陽(yáng)性，如出現(xiàn)陽(yáng)性樣品，需按照國(guó)家檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)的法定程序進(jìn)一步確證。推薦性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要有豬肝中克倫特羅檢測(cè)方法—酶聯(lián)免疫測(cè)定法(NY/XQ430-2003)、動(dòng)物性食品中克倫特羅殘留量的測(cè)定酶聯(lián)免疫吸附法(GB/T5009.192-2003)、農(nóng)牧發(fā)[2001]38號(hào)文件“豬尿中克倫特羅檢測(cè)方法-酶聯(lián)免疫測(cè)定法”、動(dòng)物性食品中萊克多巴胺殘留檢測(cè)酶聯(lián)免疫吸附法(農(nóng)業(yè)部1025公告-6-2008)等。
3高效液相色譜法(HPLC)
高效液相色譜法又叫高壓或高速液相色譜、高分離度液相色譜或近代柱色譜，以液體為流動(dòng)相，采用高壓輸液系統(tǒng)，是色譜法的一個(gè)重要分支。其原理是溶于流動(dòng)相中的各組分經(jīng)過(guò)固定相時(shí)，由于與固定相發(fā)生作用的大小、強(qiáng)弱不同，在固定相中滯留的時(shí)間也就不同，從而先后從固定相中流出而分離。HPLC是我國(guó)檢測(cè)“瘦肉精”的半確證法，適合測(cè)定熱不穩(wěn)定和強(qiáng)極性的β-激動(dòng)劑及其代謝產(chǎn)物。該檢測(cè)方法速度快，特異性強(qiáng)，分辨率高，靈敏度高，檢測(cè)限低，一般尿液、肉類(lèi)大約為0.5μg/L，且假陽(yáng)性率低，可一次檢測(cè)多種參數(shù)。但不足之處是步驟多、耗時(shí)長(zhǎng)、費(fèi)用高，對(duì)儀器設(shè)備及檢測(cè)人員的專(zhuān)業(yè)水平要求較高，難以在基層檢測(cè)部門(mén)推廣應(yīng)用。推薦性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要有飼料中鹽酸克倫特羅的測(cè)定方法NY438-2001、飼料中萊克多巴胺的測(cè)定高效液相色譜法GB/T20189-2006等。
4色譜質(zhì)譜串聯(lián)法
色譜質(zhì)譜串聯(lián)法分為氣相色譜-質(zhì)譜法(GC-MS)和液相色譜-質(zhì)譜法(LC-MS)，其原理是樣品經(jīng)氣相或液相分離的分子受離子源轟擊，電離裂解成分子離子，并進(jìn)一步碎裂為碎片離子，在電場(chǎng)和磁場(chǎng)綜合作用下，按照M/Z大小進(jìn)行分離，到達(dá)檢測(cè)器檢測(cè)、記錄和整理，得到質(zhì)譜圖，實(shí)現(xiàn)樣品定性定量分析。它的優(yōu)點(diǎn)是把色譜高效快速的分離效果和質(zhì)譜高靈敏度的定性分析有機(jī)合起來(lái)，能在多種殘留物同時(shí)存在的情況下，對(duì)某種特定的殘留物質(zhì)進(jìn)行定性、定量分析。與HPLC法相比，它具有更高的靈敏度和檢測(cè)線(xiàn)，最低檢測(cè)限可達(dá)到0.025ng，假陽(yáng)性率更低，因此我國(guó)將GC-MS/LC-MS法定為檢測(cè)“瘦肉精”的確證方法。但它的缺點(diǎn)同樣是操作步驟多、耗時(shí)長(zhǎng)、費(fèi)用高，對(duì)儀器及檢測(cè)人員檢測(cè)水平要求更高，在基層檢測(cè)部門(mén)基本無(wú)法推廣應(yīng)用推薦性檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)主要有豬肝和豬尿中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)氣相色譜—質(zhì)譜法(農(nóng)業(yè)部1031號(hào)公告-3-2008)、飼料中13種β-受體激動(dòng)劑的檢測(cè)液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法(農(nóng)業(yè)部1063號(hào)公告-6-2008)、豬尿中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法(農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-11-2008)、動(dòng)物源性食品中β-受體激動(dòng)劑殘留檢測(cè)液相色譜—串聯(lián)質(zhì)譜法(農(nóng)業(yè)部1025號(hào)公告-18-2008)等。
5結(jié)語(yǔ)
以上四種檢測(cè)方法是目前畜產(chǎn)品質(zhì)量安全監(jiān)管部門(mén)檢測(cè)“瘦肉精”殘留最常用的檢測(cè)方法，各有特點(diǎn)和不足之處，使用者應(yīng)根據(jù)實(shí)際情況適時(shí)性選擇合適本部門(mén)的檢測(cè)方法，以實(shí)現(xiàn)畜產(chǎn)品中“瘦肉精”殘留的有效監(jiān)測(cè)，進(jìn)而杜絕“瘦肉精”的非法使用，提高畜產(chǎn)品食用品質(zhì)，保障公共衛(wèi)生安全。
(武漢市動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所，裴小英)
