牛傳染性鼻氣管炎（IBR）又稱傳染性膿皰性外陰陰道炎（IPV），是由牛皰疹病毒 1 型（BHV-1）引起的牛的一種急性接觸性傳染病。臨床上分呼吸道、生殖道、腦、結(jié)膜等多種感染類型。呼吸道型以呼吸道黏膜發(fā)炎、水腫、出血和壞死為特征；生殖道型以生殖器官出現(xiàn)小膿包病變?yōu)樘卣?，表現(xiàn)為膿皰性外陰陰道炎和龜頭包皮炎，成年母牛還常伴有乳房炎、流產(chǎn)、受孕率降低和奶產(chǎn)量下降等癥狀；腦膜炎型主要發(fā)生于犢牛，表現(xiàn)共濟(jì)失調(diào)、角弓反張等腦炎癥狀；結(jié)膜炎型主要表現(xiàn)眼結(jié)膜充血、水腫和點狀壞死，眼部出現(xiàn)漿液性或膿性分泌物。該病死亡率較低，多呈亞臨床經(jīng)過，但易繼發(fā)細(xì)菌感染，導(dǎo)致支氣管肺炎等嚴(yán)重呼吸道疾病。

　　由于大量潛伏感染牛的存在，因此通過有效的診斷措施，隔離淘汰陽性牛只，使牛群逐漸得到凈化非常重要。另一方面，對于有該病流行的區(qū)域和牛群實施免疫接種，也是十分重要的控制措施。

　　牛傳染性鼻氣管炎的診斷

　　對于牛傳染性鼻氣管炎的診斷方法有病原學(xué)檢測方法和血清學(xué)檢測方法。

　　病原抗原檢測可采用中和試驗、熒光抗體試驗以及ELISA等方法，其核心試劑為 BHV-1 特異性抗血清或單抗；病原核酸的檢測可采用普通 PCR 或?qū)崟r PCR 技術(shù)，其核心試劑是針對病毒核酸的特異性引物；亞型的區(qū)分可采用亞型特異性單抗，也可采用限制性內(nèi)切酶 Hind III 對病毒核酸進(jìn)行酶切電泳分析來進(jìn)行。

　　PCR 技術(shù)特別是實時 PCR（熒光定量 PCR）比病毒分離更加敏感，陽性檢出率比病毒分離高出5 倍，應(yīng)用也越來越廣泛，特別是對精液中病毒的檢測更為便捷，是OIE 指定的病原檢測方法。PCR 引物的設(shè)計主要針對保守性較高的基因，如TK、gB、gC和 gD基因等。目前，該方法還不能區(qū)別強(qiáng)毒株和弱毒株，但針對 gE 的 PCR 可用來區(qū)別野毒株和 gE 缺失疫苗株。PCR 還可以用來區(qū)別不同型的牛皰疹病毒

　　OIE指定的熒光定量 PCR 檢測方法所用的引物和探針序列如下：

　　引物1 gB -F：5’-TGT-GGA-CCT-AAA-CCT-CAC-GGT-3’

　　位于 BHV-1 基因組的第 57 499—57 519 位核苷酸序列。

　　引物 2 gB-R：5’-GTA-GTC-GAG-CAG-ACC-CGT-GTC-3’

　　位于BHV-1 基因組的第 57 595—57 575 位核苷酸序列

　　TaqMan探針：5’-FAM-AGG-ACC-GCG-AGT-TCT-TGC-CGC-TAMRA-3’

　　位于 BHV-1 基因組的第 57 525—57 545 位核

　　苷酸序列

　　結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：Ct 值≤45 判為陽性

　　血清抗體檢測，可采用中和試驗及多種 ELISA方法進(jìn)行，如全病毒抗原間接 ELISA、gE 或 gB 阻斷ELISA等，其中間接 ELISA 和 gB ELISA 敏感性較高，而 gE ELISA 敏感性較低，不過 gE ELISA 具備區(qū)別 gE 缺失疫苗與野毒感染抗體的優(yōu)點。這些方法也可用于混合牛奶中的抗體檢測，但敏感性差異較大，其中間接 ELISA，只要牛群數(shù)量不超過 50 頭，其敏感性較好，但另外兩種 ELISA 的敏感性相對較低。

　　這些方法的核心試劑為全病毒抗原或基因表達(dá)抗原，配以相應(yīng)的單因子血清或單抗。以 gB 單抗阻斷 ELISA 的抗原制備和試驗方法如下：

　　將病毒感染 MDBK 細(xì)胞，當(dāng)出現(xiàn)明顯病變時，

　　將細(xì)胞和培養(yǎng)上清-20℃冷凍，融化后再以 8 500 g離心4 h，收集含病毒的沉淀物，用 PBS 懸浮，冰浴超聲裂解，然后 800 g 離心 10 min，收集上清并加入終濃度為0.5%的 NP40 將抗原滅活，運用有限稀釋法確定抗原的包被稀釋度，-20℃保存；將抗原用pH9.6的碳酸鹽緩沖液稀釋，100 μL/孔包板，密封后37℃過夜，-20℃保存；其余方法和步驟與一般阻斷ELISA方法相同，檢測抗體采用酶標(biāo) gB 特異性單抗，試驗中設(shè)陽性、弱陽性和陰性血清（胎牛血清，F(xiàn)CS）對照。如果血清或牛奶中含有 BHV-1 抗體，酶標(biāo)單抗與病毒抗原的結(jié)合將被不同程度地阻斷，反應(yīng)孔中將不出現(xiàn)或僅出現(xiàn)微弱的顯色反應(yīng)，通過OD 值測定，計算抑制率 （[ODFCS-OD 被檢樣品）/ODFCS×100%]，根據(jù)抑制率的大小判定結(jié)果，如：抑制率≥50%時，結(jié)果判為陽性。

　　應(yīng)特別注意ELISA 的非特異性問題：每批試劑均應(yīng)進(jìn)行特異性檢驗；采集血液時應(yīng)盡量避免溶血；樣品應(yīng)在 4℃保存，且最好在 48 h 后再進(jìn)行檢測；血清樣品在檢測前應(yīng)凍融一次，并在56℃滅能 30 min；未免疫的動物，最好不使用 gE ELISA 檢測。

　　牛傳染性鼻氣管炎疫苗預(yù)防

　　國外商品化的 IBR 疫苗很多，包括常規(guī)弱毒苗和滅活苗、低溫適應(yīng)弱毒疫苗、基因缺失弱毒苗和滅活苗、亞單位疫苗等，其中基因缺失苗和亞單位疫苗統(tǒng)稱為標(biāo)記疫苗。常規(guī)弱毒疫苗所用的種毒是經(jīng)細(xì)胞傳代致弱的毒株；常規(guī)滅活疫苗的種毒既可以是弱毒疫苗株也可以是經(jīng)分離鑒定的強(qiáng)毒株；低溫適應(yīng)弱毒疫苗的種毒是通過低溫傳代而獲得的溫度敏感變異株，病毒只能在溫度較低的上呼吸道內(nèi)復(fù)制并產(chǎn)生免疫力，而在溫度較高的內(nèi)臟器官中不能復(fù)制，因而毒力較弱；基因缺失活疫苗或滅活疫苗的種毒是用分子生物學(xué)方法將病毒復(fù)制非必需基因（如gE 或 TK）缺失而產(chǎn)生的弱毒株；亞單位疫苗則是用基因表達(dá)抗原（如 gD）生產(chǎn)的。值得注意的是，雖然所有疫苗均具有較好的臨床保護(hù)效果，但還沒有一種疫苗能防止強(qiáng)毒感染，因此實施牛群凈化仍是控制該病最有效地措施。