朱輝 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
獸醫(yī)通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)黃芪多糖注射液的安全濃度小于 640 μg/mL，Co-APS 注射液的安全濃度小于 320 μg/mL。高于安全濃度，黃芪多糖以及 Co-APS 注射液均能致使 ST 細(xì)胞死亡。而在其各自安全濃度范圍內(nèi)，較高濃度的 APS/Co-APS 注射液具有增強(qiáng) ST 細(xì)胞活性的作用。在九個(gè)梯度濃度中，320 μg/mLAPS、160 μg/mLAPS、160 μg/mL Co-APS、80 μg/mLCo-APS 具有明顯增強(qiáng) ST 細(xì)胞活性的作用；較低濃度無(wú)明顯的增強(qiáng)細(xì)胞活性的作用。在其安全濃度范圍內(nèi)，黃芪多糖對(duì)體外細(xì)胞的增殖促進(jìn)作用具有一定的量效關(guān)系；翁玲等在黃芪多糖能有效地促進(jìn)小鼠和人的骨髓以及外周血造血干/祖細(xì)胞的增殖等研究中報(bào)道了黃芪多糖對(duì)體外細(xì)胞增殖作用的影響趨勢(shì)，本試驗(yàn)結(jié)果與其相一致。
MTT 檢測(cè)法主要反映細(xì)胞的能量代謝，是檢測(cè)細(xì)胞增殖活力的一種簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確的方法，其原理是活細(xì)胞在其生長(zhǎng)和增殖過(guò)程中，線粒體內(nèi)的琥珀酸脫氫酶可將黃色可溶性的 MTT 分解成藍(lán)紫色的結(jié)晶并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞無(wú)此功能。MTT 結(jié)晶形成的量與細(xì)胞的數(shù)量和細(xì)胞的活性成正比，將其溶解在有機(jī)溶劑里，在一定波長(zhǎng)范圍內(nèi)，通過(guò)比色分析以反映成活細(xì)胞數(shù)及細(xì)胞的活性。APS/Co-APS 注射液對(duì)豬瘟細(xì)胞苗病毒在ST 細(xì)胞體外培養(yǎng)影響的實(shí)驗(yàn)中細(xì)胞活性檢測(cè)表明：320 μg/mL 黃芪多糖組以及豬瘟疫苗稀釋液組 OD 值明顯大于生理鹽水組，這說(shuō)明 320 μg/mLAPS 以及豬瘟疫苗稀釋液具有明顯增強(qiáng) ST 細(xì)胞活性的功能；160 μg/mL APS 組、160 μg/mL Co-APS 組、80 μg/mLCo-APS 組的 OD 值與生理鹽水組差異不顯著，說(shuō)明 160 μg/mL APS 組、160 μg/mLCo-APS 組、80 μg/mL Co-APS 組與生理鹽水組 ST 細(xì)胞的活性沒(méi)有明顯差異。
病毒含量檢測(cè)表明：160 μg/mL APS 組、80 μg/mL Co-APS 組以及豬瘟疫苗稀釋液組的 CT 值顯著小于生理鹽水組，但 320 μg/mL APS 組、160 μg/mL Co-APS 組 CT 值與生理鹽水組差異不顯著。160 μg/mL APS 組、80 μg/mL Co-APS 組以及豬瘟疫苗稀釋液組的病毒拷貝數(shù)顯著大于生理鹽水組，320 μg/mLAPS 組、160 μg/mL Co-APS 組的病毒拷貝數(shù)與生理鹽水組沒(méi)有顯著差異；APS 兩組中 160 μg/mLAPS 組病毒拷貝數(shù)顯著高于320 μg/mL APS 組；Co-APS 兩組中 80 μg/mL Co-APS 組病毒拷貝數(shù)高于 160 μg/mLCo-APS 組，但差異不顯著。較高濃度組病毒含量低于低濃度組，說(shuō)明較高濃度的 APS以及 Co-APS 在不同程度上具有抑制病毒在 ST 細(xì)胞上復(fù)制的作用。
綜合細(xì)胞活性檢測(cè)和病毒含量檢測(cè)結(jié)果可見(jiàn)，豬瘟疫苗稀釋液和 320 μg/mLAPS 具有明顯提高 ST 細(xì)胞活性的作用，細(xì)胞活性的增加代表細(xì)胞代謝旺盛。豬瘟疫苗稀釋液在增強(qiáng) ST 細(xì)胞活性的同時(shí)豬瘟病毒的復(fù)制含量也增加了；在 APS 組中：320 μg/mLAPS組細(xì)胞活性顯著大于生理鹽水組，但病毒含量差異不顯著；160 μg/mL APS 組的細(xì)胞活性與生理鹽水組差異不顯著，其病毒含量卻顯著高于 320 μg/mLAPS 組和生理鹽水組；在 Co-APS 組中：160 μg/mL Co-APS 組以及 80 μg/mL Co-APS 組細(xì)胞活性與生理鹽水組沒(méi)有顯著差異，80 μg/mL Co-APS 組病毒含量顯著高于生理鹽水組，高于 160 μg/mLCo-APS 組但差異不顯著，160 μg/mL Co-APS 組病毒含量也高于生理鹽水組但差異不顯著。Co-APS 注射液在其安全濃度范圍內(nèi)，160 μg/mL Co-APS 組、80 μg/mL Co-APS 組相對(duì)于生理鹽水組沒(méi)有顯著增強(qiáng)體外 ST 細(xì)胞活性的作用，但 160 μg/mL Co-APS 組病毒含量顯著低于 80 μg/mL Co-APS 組。APS 注射液在其安全濃度范圍內(nèi)，較高的濃度如320 μg/mL APS 組在顯著增強(qiáng)體外 ST 細(xì)胞活性的同時(shí)病毒含量相對(duì)于生理鹽水組沒(méi)有顯著增加，而 160 μg/mL APS 組增強(qiáng)了體外 ST 細(xì)胞活性但與生理鹽水組無(wú)顯著差異的同時(shí)其病毒含量卻顯著高于生理鹽水組，這說(shuō)明適當(dāng)較高濃度的 APS 注射液具有增強(qiáng)體外 ST 細(xì)胞活性的同時(shí)具有一定程度的抑制豬瘟病毒在 ST 細(xì)胞上復(fù)制的作用，這與黃小燕，胡元亮等人關(guān)于適當(dāng)濃度的黃芪多糖具有抑制病毒感染體外細(xì)胞的報(bào)道相一致；并且優(yōu)于低濃度的 APS 以及 Co-APS。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明豬瘟疫苗稀釋液具有增強(qiáng) ST 細(xì)胞活性的作用的同時(shí)能促進(jìn)豬瘟疫苗弱毒在體外 ST 細(xì)胞上復(fù)制的作用；適宜濃度的 APS 以及 Co-APS 也具有類似的作用（如160 μg/mL 的 APS 以及 80 μg/mL 的 Co-APS），比對(duì)不同濃度的 APS 以及 Co-APS 對(duì)細(xì)胞活性以及病毒含量的影響，加之 APS 具有增強(qiáng)免疫力的作用，160 μg/mL 的 APS 作為豬瘟疫苗稀釋液較為適宜或者按照此濃度加入疫苗作為免疫佐劑。
