李鳳 西南大學(xué)
Nichols等采用日本同仁化學(xué)研究所(Dojindo)細(xì)胞活性比色試劑盒分析糞臭素對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞(BEAS一ZB)活性的影響，結(jié)果表明:染毒24小時(shí)后5腳ol幾濃度的糞臭素能導(dǎo)致細(xì)胞活性降低約5%。糞臭素能導(dǎo)致細(xì)胞活性降低約40%，50卜mol幾濃度的糞臭素能導(dǎo)致細(xì)胞活性降低約70%，100卜mol幾濃度的糞臭素能導(dǎo)致細(xì)胞活性降低也約70%，可見(jiàn)活性降低程度隨糞臭素濃度的升高而增加，但是50卜mol/L濃度以上細(xì)胞活性的降低隨濃度變化很小。并且還發(fā)現(xiàn)過(guò)量表達(dá)細(xì)胞色素CYPZFI因子的支氣管上皮細(xì)胞對(duì)糞臭素更為敏感。
Nichols等畜牧研究人員的通過(guò)測(cè)定細(xì)胞質(zhì)中與組蛋白結(jié)合的單/雙核小體來(lái)分析糞臭素對(duì)人支氣管上皮細(xì)胞(BEAs一ZB)DNA的損傷，結(jié)果表明5林mol幾以上的糞臭素能導(dǎo)致細(xì)胞DNA的顯著損傷。weems等通過(guò)彗星電泳檢測(cè)了糞臭素對(duì)正常的人支氣管上皮細(xì)胞(NHBE)的DNA損傷，結(jié)果表明0.1卜mof幾的糞臭素即能導(dǎo)致顯著的DNA損傷。并且在7.0，12.1和13.0三種pH條件下分別進(jìn)行了彗星電泳，結(jié)果顯示糞臭素導(dǎo)致的DNA損傷主要是單鏈損傷。研究還發(fā)現(xiàn)在一定的濃度范圍內(nèi)糞臭素可導(dǎo)致DNA單鏈的嚴(yán)重?fù)p傷但是不會(huì)引發(fā)細(xì)胞凋亡。并且單鏈損傷在染毒后4小時(shí)最大，4小時(shí)后隨著修復(fù)的進(jìn)行損傷程度逐漸降低。
本實(shí)驗(yàn)為比較含糞臭素培養(yǎng)基在經(jīng)Str602口發(fā)酵前后導(dǎo)致細(xì)胞DNA損傷能力的變化，在染毒4小時(shí)后在pH=13條件下電泳檢測(cè)了單鏈損傷的情況，結(jié)果表明糞臭素確能導(dǎo)致QG一6細(xì)胞單鏈損傷，發(fā)酵不會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞單鏈損傷的加劇。Redd等有關(guān)糞臭素對(duì)鼠肝臟細(xì)胞、中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞和人穿梭載體細(xì)胞毒性作用的研究表明，各種細(xì)胞中均產(chǎn)生了DNA加合產(chǎn)物，但是并未出現(xiàn)DNA斷裂等損傷，在中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢細(xì)胞中檢測(cè)到了染色體的異常。出現(xiàn)這種結(jié)果可能是檢測(cè)DNA加合產(chǎn)物的方法靈敏度太高或者是DNA加合產(chǎn)物本身并不致突變。shadid用B6C3FI模型小鼠按照人可能接觸的最低劑量吸入糞臭素，連續(xù)吸入5天后觀察到脫氧腺普的加合產(chǎn)物并且發(fā)現(xiàn)了K-ras基因突變，K-ra:基因是公認(rèn)的原癌基因，癌癥的強(qiáng)有力生物標(biāo)記。本實(shí)驗(yàn)在PH>13的條件下檢測(cè)了糞臭素對(duì)QG一56細(xì)胞DNA的損傷，結(jié)果表明糞臭素以及含糞臭素的MMRS培養(yǎng)基確能導(dǎo)致細(xì)胞DNA的單鏈損傷，與前述Nichols和Weems等的研究結(jié)果基本一致。并且Str6020的發(fā)酵處理不會(huì)帶來(lái)DNA單鏈損傷的增加。
彗星試驗(yàn)DNA損傷指標(biāo)可歸納為形狀指標(biāo)、長(zhǎng)度指標(biāo)、強(qiáng)度指標(biāo)和復(fù)合指標(biāo)。形狀指標(biāo)根據(jù)細(xì)胞電泳后的圖像是否有像彗星一樣的拖尾將細(xì)胞分為彗星樣細(xì)胞和非彗星細(xì)胞。此指標(biāo)簡(jiǎn)單直接但是不可避免主觀性?，F(xiàn)在基本不再使用。尾長(zhǎng)和彗星長(zhǎng)都是長(zhǎng)度的指標(biāo)。這類指標(biāo)較形狀指標(biāo)更為精確，但是由于DNA分子的泳動(dòng)距離除了受分子量的影響外還受其他實(shí)驗(yàn)因素的影響，因此目前這類指標(biāo)基本不再單獨(dú)作為評(píng)價(jià)DNA損傷的指標(biāo)使用。根據(jù)彗星頭部、尾部不同區(qū)域的熒光強(qiáng)度可以反映DNA損傷程度。這類指標(biāo)就是常說(shuō)的強(qiáng)度指標(biāo)。和長(zhǎng)度指標(biāo)一樣這類指標(biāo)也很難全面真實(shí)地反映DNA的損傷程度。
計(jì)算機(jī)分析軟件的應(yīng)用和CCD(charge-couPleddeviee)圖像傳感器的高速發(fā)展使得尾矩、尾慣量這類綜合了長(zhǎng)度和強(qiáng)度指標(biāo)的復(fù)合指標(biāo)的計(jì)算和運(yùn)用成目前彗星電泳DNA損傷評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)。本實(shí)驗(yàn)在分別分析彗星長(zhǎng)、慧尾長(zhǎng)、尾部DNA%的基礎(chǔ)上同時(shí)分析了olive矩指和彗星尾/頭(長(zhǎng))這兩個(gè)復(fù)合指標(biāo)。結(jié)果顯示各評(píng)價(jià)指標(biāo)得到的結(jié)果基本一致，表明所選用指標(biāo)在本實(shí)驗(yàn)條件下能客觀顯示細(xì)胞DNA的損傷程度。
