馬豐英 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
豬肺炎支原體主要有以下幾種免疫原:三種膜蛋白即P46、p65和p70，胞內(nèi)具乳酸脫氫酶活性的蛋白p36以及粘附素主要為p97。
1細胞質(zhì)蛋白
P36蛋白在不同的豬肺炎支原體分離菌株中具有高度的保守性。Strasser等報道，p36基因在豬肺炎支原體進化過程中是高度保守而特異的，通過p36基因與已知基因和蛋白數(shù)據(jù)庫基因推導(dǎo)的氨基酸序列進行比較分析，證明p36蛋白具有L乳酸脫氫酶(LDH)活性，并能誘導(dǎo)試驗和自然感染豬的早期免疫應(yīng)答。從而證明p36是一種免疫原蛋白，重組p36蛋白或其抗體與絮狀支原體和豬鼻支原體的蛋白無免疫學(xué)交叉反應(yīng)。Haldim~等發(fā)現(xiàn)，p36蛋白是種L一乳酸脫氫酶，且與細菌的LDH同源性很高。將LDH及其氨基酸序列與已知序列進行比較可發(fā)現(xiàn)，LDH為單順反子編碼。但caronJ等采用p36重組蛋白建立的間接ELIsA方法來檢測試驗以及自然感染豬血清中的抗體，卻發(fā)現(xiàn)抗體水平與臨床病理變化不存在相關(guān)性。然而將p36蛋白的單克隆抗體用于間接免疫熒光試驗，可以檢測試驗感染豬的冷凍肺切片中的豬肺炎支原體。
2膜蛋白
豬肺炎支原體的抗原性主要來自細胞膜。張淑改等利用SDS一PAGE電泳分離膜蛋白，發(fā)現(xiàn)三種免疫優(yōu)勢蛋白:p46、p65和p74。
2.1p46蛋白
WiseKS等發(fā)現(xiàn)，p46蛋白具有種屬特異性，在豬肺炎支原體感染早期可檢到抗p46的抗體。邵國青等發(fā)現(xiàn)，J株與165弱毒株p46基因的同源性可高達96%。Fut0S等將p46基因克隆載體并轉(zhuǎn)入大腸桿菌進行原核表達，純化重組蛋白用于檢測豬肺炎支原體抗體的ELISA實驗，結(jié)果證實其與絮狀支原體、豬鼻支原體以及豬滑液支原體不存在交叉反應(yīng)。將p46和p65基因原核表達產(chǎn)物復(fù)性后免疫小鼠，制備相應(yīng)單克隆抗體，并研究其交叉反應(yīng)，結(jié)果證實該蛋白具有很高種間保守性和特異性。FreyJ等則通過采用重組p46蛋白制備的單克隆抗體，建立了檢測豬肺炎支原體的ELISA方法，效果較好。
2.2P65蛋白
KimMF等的研究表明，p65蛋白是豬肺炎支原體的一個重要免疫原，抗原區(qū)主要位于C端。P65蛋白還是一種解脂酶，是豬肺炎支原體主要具免疫原性的表面蛋白即膜蛋白之一。其可能具有損害肺組織中表面活性劑的功能，可以觸發(fā)首次或者急性感染豬肺炎支原體的斷奶仔豬和生長豬的早期免疫應(yīng)答。P65蛋白的序列中也有l(wèi)個TGA密碼子需要進行定點突變才能夠在大腸桿菌中得以表達。Bouh將P65蛋白C端基因 (1200bp)克隆到載體并轉(zhuǎn)化大腸桿菌中表達，成功地研制出針對豬肺炎支原體的種特異性表位的單克隆抗體并用于檢測豬肺炎支原體的間接ELISA實驗。CheikhSaadBouhK等的試驗結(jié)果證實了P65蛋白具有很高的種間保守性和特異性。
2.3 p74蛋白
P74是豬肺炎支原體一種具有種屬特異性的膜蛋白。Feld等用抗豬肺炎支原體P74蛋白的單克隆抗體建立的阻斷ELISA檢測方法進行檢測時發(fā)現(xiàn)，只有抗豬肺炎支原體的血清能阻斷單克隆抗體的結(jié)合。P74蛋白也是豬肺炎支原體的熱休克蛋白。
3勃附因子
豬肺炎支原體現(xiàn)已闡明的載附因子共4種，即p97、 p102、J株一個94切蛋白及Pllo，他們Rl和R2區(qū)氨基酸重復(fù)單元不同。HsuT等發(fā)現(xiàn)Rl區(qū)變異大，重復(fù)基元8一15個不等，而R2區(qū)一般3一4個重復(fù)。
3.1P97
P97豁附因子是Zhang等利用單克隆抗體FZGS發(fā)現(xiàn)的。Hsu等發(fā)現(xiàn)，p97的RI區(qū)是主要的抗原決定簇，能直接參與勃附并獨立發(fā)揮勃附功能。Young等報道，p97蛋白產(chǎn)生的IgA和IgM抗體比其它抗原的能早出現(xiàn)35一60大。Thacker等也發(fā)現(xiàn)了這一點。但是另有研究表明，用沙門氏菌或丹毒絲菌為載體表達p97的Rl區(qū)基因，免疫動物后，血清檢測不到針對p97的抗體，但能產(chǎn)生細胞免疫。eonceicao等將由p97的Rl區(qū)和致病性大腸桿菌的不耐熱腸毒素B亞單位(LTB)所組成的亞單位疫苗免疫小鼠后，可經(jīng)鼻粘膜免疫激發(fā)Thl型免疫反應(yīng)及干擾素的分泌，并可檢到較高水平抗Rl區(qū)的勃膜抗體以及血清抗體。
3.2P102
Hsu等發(fā)現(xiàn)，p97基因位于一個雙基因操縱元內(nèi)，其下游 20bp處有一個開放閱讀框編碼102.3。因pl02蛋白序列中有l(wèi)個跨膜區(qū)，推測其可能是一種膜蛋白。P102在豬肺炎支原體感染期間雖然也產(chǎn)生抗體，但是與已知勃附因子的序列并無顯著同源性。研究發(fā)現(xiàn)，p1OZ基因存在至少4個拷貝，但P97基因以單拷貝的形式存在。 ojordjevicSP等的研究表明，P102與P97是同源共生基因，可與豬支原體肺炎康復(fù)豬的血清發(fā)生反應(yīng)，掃描電子顯微鏡下可見其在支原體致病過程中表達，由此可推測p102具有潛在吸附纖毛的能力或輔助p97細胞勃附作用，與豬肺炎支原體致病性相關(guān)。
3.3PllO
Pllo蛋白是繼p97之后發(fā)現(xiàn)的又一種纖毛載著素蛋白。chen等報道， p110是一種糖蛋白而不是脂蛋白。吸附抑制試驗表明，pllo能抑制豬肺炎支原體對纖毛的戮附。
4核普酸還原酶
Fagan等發(fā)現(xiàn)一個與豬的豬肺炎支原體高免血清反應(yīng)的克隆子，合成插入片斷為HkD的多膚與原核生物NrdF的R2亞基c末端具同源性。Fagan等將此編碼nkD多膚的核酸片段克隆到沙門氏菌表達系統(tǒng)中，表達15kD的雜合蛋白，其抗血清抑制豬肺炎支原體的生長。小鼠口服該重組菌制成的活疫苗后，肺部粘膜分泌的以及血清中的抗重組NrdF的IgA和lgG明顯增加。還發(fā)現(xiàn)注射重組蛋白比單用雜合蛋白免疫小鼠的IgG效果更為顯著。AustenYChen等將NrdF插到不同的沙門氏菌表達系統(tǒng)，并對口服小鼠的免疫效果進行比較，發(fā)現(xiàn)均生細胞免疫，但因載體不同而效果不等。
