徐國華 南京農(nóng)業(yè)大學(xué)
APP的血清型較多，共有15型，我國目前發(fā)現(xiàn)的有l(wèi)、2、3、4、5、6、7、8、9、10型等幾種，常發(fā)的優(yōu)勢血清型為1、5、7型。國內(nèi)獸醫(yī)控制本病的主要手段是采取滅活疫苗進(jìn)行預(yù)防接種，但是有報(bào)道表明滅活疫苗的作用范圍僅限本血清型，對其他血清型并不能產(chǎn)生很好的交叉保護(hù)性。因此大大限制了滅活疫苗的應(yīng)用效果。雷連成等研究顯示只有活菌疫苗才能對本病產(chǎn)生較好的交叉保護(hù)性，而死菌則沒有交叉保護(hù)性，這很可能是因?yàn)锳PP活菌體內(nèi)存在某些表達(dá)的重要保護(hù)性抗原成分，而體外培養(yǎng)后制成的滅活疫苗缺失這樣的抗原成分，不能起到良好的免疫保護(hù)作用。提示尋找各型特異的毒力基因，開發(fā)真正包含各型有效保護(hù)基因的多價(jià)基因工程疫苗，是一個(gè)重要的研究方向。
本試驗(yàn)最終選擇APxl毒素作為研究對象是因?yàn)锳pxl基因是APP最強(qiáng)的毒力基因，目前發(fā)現(xiàn)APP至少分泌4種不同的APx毒素，其中Apxl的毒性最強(qiáng)[s1，分泌APxl的血清型1、5、9、10、11型的毒力在妙P各個(gè)血清型中也是最強(qiáng)的，它們也往往導(dǎo)致傳染性胸膜肺炎的急性爆發(fā)。因此理論上可以推斷，Apxl的抗原性是最高的，由它制成的亞單位疫苗的效果也將是最好的。另外，國內(nèi)的常發(fā)型為1、5、7等幾個(gè)，大部分都分泌APxl，因此選擇APxl也更適用。
Apxl操縱子是由四部分構(gòu)成的，分別是激活基因Apx工c、結(jié)構(gòu)毒素基因 APxIA、分泌必需基因 APxIB和 APxID，順序是APx卜CABD。其中 APxIA基因編碼毒素結(jié)構(gòu)蛋白，該蛋白N端含有3個(gè)疏水功能區(qū)，C端為甘氨酸含量豐富的九膚串聯(lián)重復(fù)功能區(qū)，是毒素發(fā)揮活性所必需的。seah等對 APxIA毒素蛋白N端疏水區(qū)的原核表達(dá)產(chǎn)物免疫原性分析顯示，可對攻毒小鼠提供較好的免疫保護(hù)。
徐福洲等通過研究APx工A的N端和c端的免疫原性的差異，發(fā)現(xiàn)N端表達(dá)產(chǎn)物的免疫活性顯著高于c端，對小鼠的保護(hù)力達(dá)到60%一70%，這與Bhatia等報(bào)道的利用提純的APx毒素作為免疫原免疫小鼠的保護(hù)力相當(dāng)。進(jìn)一步證實(shí)了 APxIA毒素蛋白的N端在免疫保護(hù)活性中的重要作用。
因此，本試驗(yàn)選擇擴(kuò)增APx工A毒素基因的N端960bp大小的片段，經(jīng)過weste扭blotting分析、抗體動(dòng)態(tài)效價(jià)測定以及免疫保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果，充分顯示了其優(yōu)秀的免疫原性。綜合上述結(jié)果，可以證明APx工A是APP最重要毒力蛋白。而且理論上 APxIA具有良好的交叉保護(hù)性，為國內(nèi)APP基因工程亞單位疫苗的研制提供參考。
