劉龍飛 河北農(nóng)業(yè)大學(xué)
由于 EK 識(shí)別的酶切位點(diǎn)專一性強(qiáng)，即識(shí)別 6 個(gè)氨基酸殘基組成的多肽序列，同時(shí)對(duì)切割點(diǎn)羧基端的氨基酸沒(méi)有特異性要求，所以利用基因工程制備重組融合蛋白時(shí)，EK 酶切位點(diǎn)常被用來(lái)作為重組融合蛋白的切割位點(diǎn)。用 EK 切割融合蛋白不僅能夠確保其它部位的肽鍵不被破壞，同時(shí)切割后所釋放的目的多肽具有和野生型完全一致的 N-末端氨基酸序列，因此 EK 作為蛋白表達(dá)體系中融合蛋白的切割試劑被廣泛利用。
抗菌肽作為畜禽飼料抗菌添加劑具有良好的畜牧應(yīng)用前景。由于抗菌肽分子量較小，利用酵母或大腸桿菌很難表達(dá)這類小分子多肽。然而通過(guò)融合基因表達(dá)策略可以提高重組抗菌肽的表達(dá)水平。近幾年本實(shí)驗(yàn)室在重組動(dòng)物抗菌肽方面進(jìn)行了廣泛的研究，為提高抗菌肽在酵母或大腸桿菌中的表達(dá)水平，擬采用融合方式或串連體方式表達(dá)重組抗菌肽，然后采用的 EK 酶切位點(diǎn)釋放出具有生物活性的抗菌肽。利用EK 切割融合蛋白可以保證重組蛋白 N 端的氨基酸不被改變，獲得不帶任何附加氨基酸的目的蛋白，從而不影響重組蛋白的活性。這就需要大量的腸激酶。目前市售的腸激酶價(jià)格昂貴而天然的腸激酶來(lái)源有限，并且提取分離的成本高，加之天然提取的腸激酶易被其它蛋白酶污染，造成切割融合蛋白的同時(shí)又降解了目的產(chǎn)物，而運(yùn)用基因工程的方法來(lái)生產(chǎn)腸激酶可以彌補(bǔ)這些不足。目前，多見關(guān)于牛腸激酶的研究。對(duì)豬腸激酶的的研究未見報(bào)道。因此，本試驗(yàn)考慮到生產(chǎn)成本、表達(dá)量和重組蛋白活性等方面，對(duì)豬的腸激酶輕鏈分別采用了畢赤酵母表達(dá)體系和原核表達(dá)體系進(jìn)行了表達(dá)。
