楊顯超 南京農(nóng)業(yè)大學
1.血清學診斷
至今已經(jīng)有多種血清學方法被用于月，占的診斷，包括補體結(jié)合試驗(CF)，間接血凝試驗 (lHA)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELIsA)等。
Nielsen等在急性感染的臨床病例中發(fā)現(xiàn)大約一周后出現(xiàn)循環(huán)cF抗體，并且各血清型之間存在交叉反應現(xiàn)象。kahashi等進行了一項免疫實驗并用cF測定抗體滴度，在二免后19日記錄陽性抗體滴度。MiniatS等用超聲波破碎的細菌或煮沸的細菌上清作為包被抗原致敏綿羊紅細胞以建立IHA，同時以煮沸細菌的上清或經(jīng)過透析的熱酚水提取物如LPS作為包被抗原建立ELISA，結(jié)果顯示兩種檢測方法不太穩(wěn)定且容易出現(xiàn)假陽性結(jié)果。
然而，與補體結(jié)合試驗、ELISA方法進行比較，IHA試驗更方便、快捷，凝集圖形清晰，易于判定，結(jié)果可靠，間接血凝診斷抗原用于檢測大批量血清樣品的了HPS抗體具有較高的利用價值。oliveira采用勁只5，超聲波破碎抗原鹽析物建立了ELISA檢測方法，該方法能檢測出免疫豬的抗體及仔豬母源抗體。該方法對月子客抗體呈明顯的凝集反應，而對陰性血清和豬偽狂犬病毒、豬繁殖與呼吸綜合征病毒、支氣管敗血性波氏桿菌血清不出現(xiàn)陽性反應，表明此方法具有良好的特異性。王艷獸醫(yī)等采用福爾馬林滅活得副豬嗜血桿菌全菌作為包被抗原，建立了檢測副豬嗜血桿菌抗體的間接ELISA方法，該方法具有很高的特異性和重復性，并利用此方法對發(fā)病豬場100份血清進行檢測，結(jié)果陽性檢出率為94%，明顯高于細菌分離鑒定的結(jié)果。
2. 免疫組化法診斷
由于細菌分離鑒定存在某些不足之處，對刀尹萬的診斷因此一些學者求助于免疫組化法，利用該技術已從實驗性感染的臨床病料中檢出月尹萬，此方法的最大優(yōu)點是能夠從巨噬細胞的胞漿中檢測出死的細菌。aquilm等用一種親和素一生物素復合IHc技術對血清型5型菌株經(jīng)氣管途徑接種感染的10只18-21日齡豬進行檢測，其中7只表現(xiàn)為中度纖維素性多發(fā)性漿膜炎;腦膜和胸膜為感染最為嚴重的區(qū)域;從9只豬種回收到月尹5，，其中有2只僅從氣管拭子分離到細菌。接種的豬扁桃體中樹突狀細胞和巨噬細胞被免疫染色;在損害的支氣管、肺泡和間隙性巨噬細胞被強烈地染色;其中有8個樣品免疫組化試驗呈陽性，在膿性纖維蛋白滲出物的炎癥細胞胞漿中可見細菌或游離的細菌;了式只夕只和APP出現(xiàn)了交叉反應，而與其他的細菌未出現(xiàn)交叉反應。
3分子生物學診斷
聚合酶鏈式反應是20世紀80年代中期發(fā)展起來的體外擴增技術，具有特異、敏感、產(chǎn)率高、快速、簡便、重復性好、易自動化等突出優(yōu)點。它可以用設計為群、屬、種或者菌株特異性的引物來滿足不同的檢測要求，在許多細菌學實驗室PCR方法己經(jīng)取代了費工費時的生化鑒定，幾個小時即可將細菌鑒定到種。oliveria等160]根據(jù)月畢份的 16srRNA的保守序列設計引物建立了一個特異的PCR檢測方法，進一步增加了臨床樣本中檢測刀只夕的敏感性，其最低檢測濃度為100CFU/mL。此方法不僅能夠直接對臨床樣品進行檢測，而且能對死細菌進行檢測。然而用叫噪放線桿菌DNA為模板時，擴增出一個弱的條帶。叫垛放線桿菌也為上呼吸道的正常菌群，因此建議用全身性采集的樣本來進行檢測。 YsteinAngen等根據(jù)巧株參考菌株的16srDNA序列進行優(yōu)化建立了一種新的復合 PCR檢測方法，該方法設計了3條引物，擴增產(chǎn)物為lo86bp左右的片段。該方法與之前oliveira等建立的PCR方法相比，具有高度的種特異性，能夠?qū)⒏必i嗜血桿菌與叫噪放線桿菌，豬放線桿菌，微小放線桿菌區(qū)分開。然而也有其缺點，直接運用于臨床樣品檢測敏感度略低于Oliveira等建立的PCR方法，對細菌純培養(yǎng)進行檢測時其敏感度只有Oliveira方法的1/10。
