張舒 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
副豬嗜血桿菌主要是從宿主有病變的組織以及體腔積液等位置分離。將病豬的鼻拭子、肺臟、胸膜、胸腹腔積水、心包積液、心血、關(guān)節(jié)液和腦組織等病料，在TSA培養(yǎng)基上劃線培養(yǎng)，進(jìn)行微生物學(xué)鑒定。37℃培養(yǎng)48h后挑取白色半透明直徑為lmm左右的單個(gè)菌落進(jìn)行純培養(yǎng)。將可疑菌的單菌落與金黃色葡萄球菌垂直劃線于不加NAD的培養(yǎng)基平板上，37℃培養(yǎng)24h一48h，在接近葡萄球菌位置長(zhǎng)出菌落，遠(yuǎn)離葡萄球菌位置無(wú)法生長(zhǎng)細(xì)菌，并將這些細(xì)菌接種在血平板上無(wú)溶血現(xiàn)象時(shí)，即可初步判定為副豬嗜血桿菌。再將分離到得菌株進(jìn)行生化鑒定，進(jìn)一步確認(rèn)。
獸醫(yī)使用PCR方法可以更準(zhǔn)確的檢測(cè)到副豬嗜血桿菌的存在。Oliveira等設(shè)計(jì)的編碼 165rRNA基因片段的擴(kuò)增引物和Redondo等設(shè)計(jì)的編碼轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白A基因片段的擴(kuò)增引物被廣泛使用。該檢測(cè)方法，操作簡(jiǎn)便，結(jié)果可靠，可以避免血清學(xué)試驗(yàn)中交叉反應(yīng)。直接檢驗(yàn)臨床樣品的HPS特異性和血清型的PCR方法可更好的輔助臨床診斷。
該菌的血清分型主要使用瓊脂擴(kuò)散法，間接血凝(IHA)也有廣泛應(yīng)用但效果還有一定爭(zhēng)議。間接ELISA技術(shù)也被應(yīng)于副豬嗜血桿菌抗體的檢測(cè)，但是這種方法不能進(jìn)行血清型分類。
在診斷方面，主要是從臨床癥狀和病理剖檢來(lái)鑒定副豬嗜血桿菌病。急性疾病主要以漿液性一纖維蛋白吐多發(fā)性漿膜炎和多發(fā)性關(guān)節(jié)炎為主要特征病變。急性發(fā)病的早期癥狀包括發(fā)熱、食欲不振，以及呼吸困難、跋行、關(guān)節(jié)腫脹、運(yùn)動(dòng)不協(xié)調(diào)、不愿活動(dòng)、發(fā)給、有的會(huì)導(dǎo)致死亡。耐過(guò)急性發(fā)病的豬表現(xiàn)為被毛粗亂、咳嗽、呼吸困難和生長(zhǎng)遲滯。
目前關(guān)于副豬嗜血桿菌的致病因子并沒(méi)有明確的報(bào)道。有人推測(cè)，同其他細(xì)菌類似，決定HPS毒力和致病性的主要因素是細(xì)菌毒素，例如在其他親緣關(guān)系較近的細(xì)菌中被確認(rèn)為毒力因子的細(xì)胞膨脹致死毒素 CDT，在本菌中也存在，但其毒力功能還沒(méi)有明確報(bào)道。許多菌株具有編碼菌毛結(jié)構(gòu)的一系列基因，可能有助細(xì)菌侵入機(jī)體后粘附于細(xì)胞表面。莢膜多糖、外膜蛋白甚至整個(gè)細(xì)菌蛋白均與細(xì)菌毒力有關(guān)，至于這些蛋白質(zhì)的具體功能還存在爭(zhēng)議。據(jù)研究，患病豬與健康豬中分離出的副豬嗜血桿菌的OMP不同，而引發(fā)明顯癥狀的分離株的OMP基本相同，表明外膜蛋白OMP與副豬嗜血桿菌的毒力有關(guān)。免疫動(dòng)物產(chǎn)生針對(duì)于OMP的抗體，說(shuō)明OMP具有很好的免疫原性，但仍需進(jìn)一步研究。 LichtensteigerCA在副豬嗜血桿菌的分泌蛋白中提純出有潛在毒力的神經(jīng)氨酸酶，但需要進(jìn)一步驗(yàn)證。
目前對(duì)副豬嗜血桿菌毒力基因的研究大部分是在體外模擬自然感染所處環(huán)境下開展的，僅有很少的毒力基因報(bào)道，對(duì)其毒力因子和致病機(jī)理仍不清楚。該菌目前也沒(méi)有特別合適的動(dòng)物模型，如對(duì)小鼠致死解剖后卻沒(méi)有明顯病變。有文獻(xiàn)報(bào)道豚鼠可以作為副豬嗜血桿菌的動(dòng)物模型，但還需進(jìn)一步驗(yàn)證。因此體內(nèi)誘導(dǎo)抗原技術(shù)作為一種不需要?jiǎng)游锬Ｐ?，且能夠真?shí)還原動(dòng)物體內(nèi)表達(dá)狀況的篩選基因的方法，能為該病原菌毒力因子的鑒定和診斷方法建立以及藥物靶標(biāo)等的篩選提供理論基礎(chǔ)，促進(jìn)副豬嗜血桿菌的研究。
副豬嗜血桿菌引起的副豬嗜血桿菌病在近幾年來(lái)的流行趨勢(shì)呈上升狀態(tài)，對(duì)于該病菌的毒力因子、快速準(zhǔn)確的診斷方法以及有效的預(yù)防控制方法的研究就顯得尤為重要。盡管目前已經(jīng)取得了一些進(jìn)展，但很多機(jī)理并未闡明，也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明確的毒力因子。在HPS致病因子及其致病機(jī)理的研究領(lǐng)域尚有很多方向值得研究，多種疾病的混合感染，HPS的繼發(fā)感染的研究也有待深入探討。
