劉杉杉 中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院
獸醫(yī)在臨床診斷豬捷申病的時(shí)候須注意與引起神經(jīng)癥狀、繁殖障礙的其他病毒如狂犬病毒（RV）、偽狂犬病毒（PRV）、非洲豬瘟病毒（ASFV）、腦心肌炎病毒（EMCV）、豬細(xì)小病毒（PPV）、豬乙型腦炎病毒（JEV）、豬繁殖與呼吸綜合癥病毒（PRRSV）、豬瘟病毒（CSFV）、豬圓環(huán)病毒 2 型（PCV2）等加以區(qū)別。另外，對(duì)于有腦炎癥狀、母豬發(fā)生繁殖障礙以及高發(fā)病率和死亡率的豬群，可能是 PTV 感染。確診應(yīng)進(jìn)行病毒分離鑒定和血清學(xué)檢查，同時(shí)利用組織學(xué)方法作進(jìn)一步的驗(yàn)證。
1 病毒分離
雖然目前各種檢測方法不斷涌現(xiàn)，但是病毒分離仍被作為 PTV 檢測的標(biāo)準(zhǔn)方法，并在早期PTV 的診斷中發(fā)揮了重要作用。具體方法為取初生弱仔、死胎或畸形胎兒的扁桃體、肝、腸、糞便以及腦組織等，制成組織培養(yǎng)用懸液，接種于豬的胚胎、腎、腸或 PK-15 單層細(xì)胞，培養(yǎng) 3~6 天，觀察細(xì)胞病變。初代培養(yǎng)病毒滴度往往較低，難以判定，因此應(yīng)盲傳幾代再觀察病變或做免疫酶染色。病毒分離的方法雖然可靠，但是需要在實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不利于快速檢測。
2 分子生物學(xué)診斷
聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng) ( polymerase chain reaction, PCR ) 方法現(xiàn)在已被廣泛應(yīng)用于診斷學(xué)中，其最大的優(yōu)勢是對(duì)樣本的級(jí)數(shù)擴(kuò)增：在特異性引物引導(dǎo)之下，能將皮克水平的 DNA 擴(kuò)增 100 萬倍到微克水平，從而達(dá)到可檢測范圍。這種擴(kuò)增與病毒增殖不同，只是增加無感染性分子的拷貝數(shù)，無生物安全問題。因此，RT-PCR 技術(shù)具有敏感、特異、快速和安全的特點(diǎn)，對(duì)于實(shí)驗(yàn)室的早期快速檢測和診斷具有重要的意義。Zell 等通過使用三套引物擴(kuò)增高度保守的 5′非翻譯區(qū)或相關(guān)病毒的多聚基因區(qū)以檢測所有已知的 PEV 的血清型；Joseph 等建立了一種采用同一套引物能鑒定 PTV 和 PEV-A 病毒的 RT-PCR 方法，并且擴(kuò)增后 PTV 和 PEVA長度不同；La Rosa 等建立了一種最新的通過擴(kuò)增 VP1 以區(qū)分 PTV 和 PEV-B 病毒的 RT-PCR 方法，并在參考毒株上得到了驗(yàn)證。在此基礎(chǔ)上發(fā)展起來的熒光定量 PCR 方法，在敏感性上又有所提高，但是熒光定量 PCR 因?yàn)閷?duì)引物的特異性要求高、試驗(yàn)過程中耗材和儀器昂貴以及假陽性現(xiàn)象普遍而受到限制。
3 血清學(xué)診斷
捷申病毒的血清學(xué)診斷方法有免疫熒光試驗(yàn)（IF）、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、斑點(diǎn)酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（Dot- ELISA）及病毒中和試驗(yàn)（VNT）等。目前 IF 和 ELISA 應(yīng)用最廣泛，但由于捷申病毒存在多種血清型，最有權(quán)威性的檢測方法還是 VNT。其他的檢測方法如補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)，雖然更加敏感，但易產(chǎn)生部分血清型的交叉感染。
4 組織學(xué)方法
免疫組化可以確定病毒在組織和細(xì)胞中的具體位置，具有簡單、快速的優(yōu)點(diǎn)。Yamada 等通過該方法檢測 PTV 的分布，發(fā)現(xiàn) PTV 的分布與大腦的病變密切相關(guān)，并在肺的細(xì)支氣管的上皮細(xì)胞、肝細(xì)胞、扁桃體上皮細(xì)胞以及腸肌層的神經(jīng)叢內(nèi)發(fā)現(xiàn)該病毒。這種組織學(xué)方法為該病的確診提供了進(jìn)一步的依據(jù)。
