熊煒 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
目前獸醫(yī)用于EP診斷的血清學(xué)試驗(yàn)包括凝集試驗(yàn)、放射免疫擴(kuò)散測(cè)定試驗(yàn)、間接血凝試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)等，以間接血凝試驗(yàn)(IHA)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)(CFT)和酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELlsA)更為理想。
1.間接血凝試驗(yàn)
IHA是診斷EP常用方法之一，具有一定的特異性和敏感性。Dowdle等最先用IHA進(jìn)行MHYO抗體檢測(cè)，但豬血清會(huì)使綿羊紅細(xì)胞破裂而產(chǎn)生溶血。Lam等用豬的紅細(xì)胞替代綿羊紅細(xì)胞，雖然不易發(fā)生溶血現(xiàn)象，但效價(jià)比用綿羊紅細(xì)胞低。由于血清易使紅細(xì)胞溶血，個(gè)體差異的存在使紅細(xì)胞的制備不易標(biāo)準(zhǔn)化，不易操作等缺點(diǎn)，IHA的臨床應(yīng)用受到一定的限制。
2.補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)
CFT也是檢測(cè)豬血清中MHYO抗體的有效方法之一，包括微量修正補(bǔ)體試驗(yàn)和微管補(bǔ)體試驗(yàn)。早在1983年，日本已將cFT作為常規(guī)手段檢測(cè)MHYO抗體。在對(duì)自然感染豬和實(shí)驗(yàn)接種豬進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，CFT陽性率與豬肺部病變的相關(guān)性良好，但仍存在著很高的假陰性和假陽性。Lloyd等認(rèn)為，循環(huán)抗原的存在是假陰性出現(xiàn)的原因，假陽性的出現(xiàn)是由于與其它支原體發(fā)生交叉反應(yīng)。此外，CFT不能確定豬在4-9周齡的感染情況。雖然cFT在特異性和敏感性方面有一定的局限性，如綜合運(yùn)用臨床和組織病理診斷，CFT仍是診斷MHYO感染的有效手段。
3.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)
ELISA是現(xiàn)在最常用于EP診斷的方法之一，它具有敏感性高、特異性強(qiáng)和能進(jìn)行定量分析等特點(diǎn)。Bruggmalm等首次建立了用于MHYO抗體檢測(cè)的間接ELIsA，該法敏感性高，但與豬的其他支原體存在交叉反應(yīng)[62J。Nicolet等改用Tween-20提取蛋白作為抗原，建立間接ELISA檢測(cè)MHYO抗體，此法特異性更高，但與絮狀支原體存在交叉反應(yīng)。Bereite:等通過改進(jìn)Tween一 20ELIsA降低了與絮狀支原體交叉反應(yīng)。Futo等克隆表達(dá)P46基因，提純重組的P46蛋白作為抗原建立ELlsA，該方法與其它豬支原體沒有交叉反應(yīng)。Feld等建立了一種單克隆抗體阻斷ELlsA，該方法可通過單個(gè)抗原決定簇檢測(cè)MHYo抗體。隨后，Potier等用MHYO種特異性的40ku膜蛋白作抗原，建立了單克隆抗體阻斷ELISA，該法與豬鼻支原體和絮狀支原體沒有交叉反應(yīng)。1987年，Mori等用Tween-20溶解的抗原和抗 MHYoP46蛋白的單克隆抗體建立雙夾心ELIsA以檢測(cè)抗MHYo的抗體。Futo等研究表明，在E.oli中表達(dá)的重組P46蛋白，可用于建立特異性ELISA檢測(cè)MHYO抗體。
Okada等以純化的抗豬肺炎支原體P46蛋白的單克隆抗體和在E.coli中表達(dá)的重組P46蛋白抗原建立了一種雙夾心ELISA，臨床檢測(cè)結(jié)果表明，這種新的雙夾心ELIsA可以取代現(xiàn)在用于診斷EP的cFT。Feng等 (2010)使用在大腸桿菌中表達(dá)的 MHYoP97RI作為抗原，建立了一種用于MHYo分泌型lgA抗體檢測(cè)的間接ELISA(slgA一ELIsA)，用廿CR和商品化的 MHYOIgG一ELISA檢測(cè)試劑盒對(duì)該法進(jìn)行了驗(yàn)證。和n一PcR相比， SlgA一ELlsA檢測(cè)的靈敏度為97.0%，特異性為94.4%，準(zhǔn)確性為95.8%。重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果表明，變異系數(shù)小于10%。該方法可用于MHYO感染的大范圍調(diào)查。
