肖文 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
豬傳染性胃腸炎（TGE）在主要在冬季和早春寒冷的季節(jié)暴發(fā)流行，常呈地方性傳播，該病目前仍是引起仔豬死亡的主要原因之一，給養(yǎng)豬業(yè)造成了極大危害。因此對(duì)豬傳染性胃腸炎病毒（TGEv）的檢測(cè)，是防治該病至關(guān)重要的一部分。目前獸醫(yī)針對(duì)TGEV的檢測(cè)方法主要有病毒的分離與鑒定，電鏡技術(shù)檢測(cè)，血清學(xué)檢測(cè)，免疫組化技術(shù)檢測(cè)和PCR技術(shù)檢測(cè)等。
1. 病毒分離鑒定
目前實(shí)驗(yàn)室最常用來分離TGEv的細(xì)胞系有ST、PK巧和IBRSZ細(xì)胞系。上述傳代細(xì)胞均成功的分離出TGEV。經(jīng)由消化道感染的豬只在進(jìn)行病毒的分離與檢測(cè)時(shí)，一般取患病豬的腸內(nèi)容物或者小腸段進(jìn)行實(shí)驗(yàn)，這是最易分離與檢測(cè)到TGEV的組織部分。病毒在細(xì)胞上產(chǎn)生典型的細(xì)胞病變(CPE)有細(xì)胞呈現(xiàn)圓形或長形，膨脹如氣球狀。對(duì)于初次進(jìn)行分離的野毒株，可能不會(huì)出現(xiàn)明顯的CPE，此時(shí)需要通過連續(xù)傳代后才能出現(xiàn)明顯的CPE。為了增加病毒的分離效率，在細(xì)胞培養(yǎng)液中添加適量的胰酶或胰蛋白酶以及運(yùn)用較老的細(xì)胞是一種很有效的方法。陳煥春等利用原代豬甲狀腺組織培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行TGEV分離，在盲傳九代后出現(xiàn)了穩(wěn)定的且具有典型的TGEV的CPE，然后再適應(yīng)PK一巧細(xì)胞獲得成功。
2. 病毒電鏡檢測(cè)
對(duì)TGEV進(jìn)行電鏡檢測(cè)是常用的方法之一，通過電鏡檢測(cè)表明，在患病豬的腸內(nèi)容物和糞便中能夠檢測(cè)到TGEV，而且病毒主要分布在胞漿的空泡里和微絨毛間隙中，病毒在微絨毛間的通常呈串球狀排列。有研究表明，通過免疫電鏡(IEM)能夠更敏感的檢測(cè)出臨床樣品中或者細(xì)胞培養(yǎng)物中的TGEV，它比常規(guī)EM檢測(cè)方法更好，并且IEM還能夠進(jìn)行血清學(xué)鑒定。同時(shí)IEM檢測(cè)方法能夠更好的區(qū)分出TGEV以及檢測(cè)出其他腸道中 TGEV的存在。
3. 血清學(xué)診斷
血清學(xué)檢測(cè)是實(shí)驗(yàn)室對(duì)TGE最常用的檢測(cè)方法。血清學(xué)檢測(cè)包括抗原和抗體檢測(cè)兩個(gè)方面。其中對(duì)病毒抗原的檢測(cè)包括有免疫組化法及酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)等。主要是從仔豬糞便或者腸內(nèi)容物中檢測(cè)。若仔豬出現(xiàn)有腹瀉，同時(shí)通過免疫熒光法(IF)或者免疫免疫過氧化物酶試驗(yàn)方法檢測(cè)，呈陽性，則基本可以肯定其為TGEV(斯特勞等，2000)。此外，多克隆抗體雙夾心ELISA法也廣泛應(yīng)用于病毒抗原的檢測(cè)。。但由于目前應(yīng)用在抗原檢測(cè)中的抗體主要是多克隆抗血清，因此，在檢測(cè)中常出現(xiàn)穩(wěn)定性較差且非特異性強(qiáng)，往往給診斷帶來誤差。
對(duì)病毒抗體的檢測(cè)包括有中和試驗(yàn)、間接熒光抗體試驗(yàn)及ELISA等。其中，中和試驗(yàn)是利用病毒與特異性的抗體相互作用后進(jìn)行測(cè)定，它是病毒血清抗體檢測(cè)的基礎(chǔ)方法。但，由于病毒中和試驗(yàn)的成本高，所需時(shí)間長，且操作嚴(yán)格，因此不適合進(jìn)行大量的臨床樣本檢測(cè)。而當(dāng)前實(shí)驗(yàn)室運(yùn)用最廣泛的是ELISA，它具有高靈敏性和特異性。Nelson等比較了兩種方法，結(jié)果表明ELISA方法敏感性強(qiáng)于中和試驗(yàn)，且得出結(jié)果所需時(shí)間早于中和試驗(yàn)。
