邊棟 東北農(nóng)業(yè)大學(xué)
1 高效液相色譜法的研究進(jìn)展
常用的檢測方法就是利用濃度類型的紫外檢測器和熒光檢測器。由于多數(shù) β-內(nèi)酰胺類抗生素沒有專一的紫外發(fā)色基團(tuán)，其最大吸收波長一般在 200 nm~235 nm。在這段波長范圍內(nèi)，選擇性一般都很差。為減小檢測痕量 β-內(nèi)酰胺類抗生素時背景的干擾，引入了柱前或柱后衍生化技術(shù)，通過柱前衍生化反應(yīng)可以有效地提高紫外檢測器檢測 β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留的靈敏度。
HPLC 方法測定阿莫西林的含量和有關(guān)物質(zhì)，用 C18色譜柱，以乙腈：磷酸鹽緩沖液為流動相進(jìn)行梯度洗脫，檢測波長 230 nm。結(jié)果顯示，阿莫西林在 0.10 mg/mL~0.60 mg/mL 濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，阿莫西林的平均回收率為 99.4%。方法可靠、簡便、準(zhǔn)確。
用阿莫西林對照品加校正因子對克拉維酸的含量進(jìn)行測定，阿莫西林與克拉維酸進(jìn)樣量分別在 0.2178 μg~6.5340 μg（r=1.0000）與 0.0632 μg~1.8974 μg（r=1.0000）范圍內(nèi)與其峰面積呈良好的線性關(guān)系，克拉維酸與阿莫西林之間的校正因子 f=1.330，克拉維酸回收率為99.29% （n=9）。將校正因子應(yīng)用到阿莫西林克拉維酸鉀片中進(jìn)行含量測定是可行的、實用的。
研究固體阿莫西林的降解動力學(xué)規(guī)律，采用 HPLC 法測定阿莫西林的含量，在恒溫恒濕條件下進(jìn)行加速試驗，以獲得與溫度、濕度相關(guān)的動力學(xué)參數(shù)。結(jié)果為阿莫西林遵從一級降解動力學(xué)規(guī)律。
測定阿莫西林克拉維酸鉀分散片中阿莫西林的含量，采用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，以磷酸鹽緩沖液-甲醇（95: 5）為流動相，結(jié)果: 阿莫西林在 132 μg/mL~308 μg/mL , 范圍內(nèi)線形良好，平均回收率為 99.8%，RSD 為 0.62%。該方法簡便，重現(xiàn)性好，專屬性強(qiáng)，為評價該制劑的質(zhì)量提供了可靠的方法。
2 氣相色譜法的研究進(jìn)展
β-內(nèi)酰胺類抗生素需要經(jīng)過復(fù)雜的前處理過程才能得到適于氣相色譜分離的衍生化產(chǎn)物，目標(biāo)物質(zhì)的回收率難以得到保證，因此 GC 已經(jīng)基本上被液相色譜法所取代。在有報道的 GC，常用的檢測器為氮磷檢測器。使用氮磷檢測器往往可以獲得較好的檢測限，對生物樣品可以達(dá)到 3 μg/kg，但是檢測器缺乏選擇性，會收到來自基體中的含氮物質(zhì)的干擾。
以頂空氣相色譜法測定阿莫西林中有機(jī)溶劑殘留量的方法，色譜柱為 HP-5 毛細(xì)管柱，柱溫采取程序升溫，檢測器溫度為 250℃，載氣為氮?dú)猓魉贋?2 mL/min , 分流比為 20:1，結(jié)果顯示，丙酮、二氯甲烷、三乙胺三種溶媒檢測濃度線性范圍分別為 15 ppm~494 ppm（r=0.9990）、45 ppm~1500 ppm（r=0.9992）、18 ppm~600 ppm（r=0.9992），平均回收率分別為 94.7%、9 7.6%、9 6.4%， RSD 分別為 1.45%、1.13%、2.50%，本方法簡便、結(jié)果準(zhǔn)確，適用于阿莫西林中有機(jī)溶劑殘留量的測定。
3 液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜法的研究進(jìn)展
串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)的基本原理：首先將化合物分子被電子轟擊，產(chǎn)生碎片離子，選擇目標(biāo)化合物中所具有某一特征的碎片離子，并將其隔離出來（母離子）；然后，使用惰性分子碰撞被隔離出來的母離子，并使其碎裂成若干的小碎片離子（子離子）；最后，對產(chǎn)生的子離子掃描，獲得二級質(zhì)譜圖，使其與標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行對照，或與質(zhì)譜庫中儲存的二級質(zhì)譜圖進(jìn)行比對，最終確認(rèn)化合物的結(jié)構(gòu)。
LC-MS/MS 聯(lián)用的優(yōu)點(diǎn)非常顯著，因為氣相色譜只能分離易揮發(fā)且不分解的物質(zhì)，而液相色譜則把分離范圍大大拓寬了，生物大分子也能分離，LC 與高選擇性、高靈敏度的 MS/MS結(jié)合，可對復(fù)雜樣品進(jìn)行實時分析，即使在 LC 難分離的情況下，只要通過 MS/MS 對目標(biāo)化合物進(jìn)行中性碎片掃描，則可發(fā)現(xiàn)并突出混和物中的目標(biāo)化合物，顯著提高信噪比來增強(qiáng)靈敏度。
HPLC/MS/MS 快速測定牛奶中 6 種青霉素類抗生素殘留的方法。高效液相色譜 C18柱分離，26 min 內(nèi)在線梯度洗脫，6 種青霉素類抗生素得到分離，回收率大于 90%，為牛奶中多組分 β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留的定性和定量檢測提供了重要參考方法（黃百芬等，2007）。HPLC/MS/MS測定豬肉中5種青霉素類藥物殘留的方法。經(jīng)檢測，回收率在52%～82.8%之間，該方法適用于豬肉組織中β-內(nèi)酰胺類抗生素殘留的檢測（范瑩瑩等，2007）。動物組織中氨苯砜及其代謝產(chǎn)物N-乙酰氨苯砜的液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜檢測方法，采用YMC-PackPro C18反相色譜柱，以堿性乙腈為提取液，以HLB和MCX固相萃取柱為凈化柱，乙腈-水為流動相，梯度洗脫，流速0.3 mL/min，以正離子多反應(yīng)監(jiān)測模式測定, 同位素內(nèi)標(biāo)法定量，進(jìn)樣量15 μL。方法的定量下限為0.5 μg/kg，線性范圍為0.5 μg/kg~5.0 μg/kg，加標(biāo)回收率為92%~103%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差為4.8%~11.0% 。該法具有靈敏、準(zhǔn)確等優(yōu)點(diǎn)，適用于動物組織中氨苯砜及其代謝產(chǎn)物N-乙酰氨苯砜殘留的確證檢測。
同時測定飼料中8種苯并咪唑類藥物（噻苯咪唑、丙硫咪唑、硫苯咪唑、苯硫氧咪唑、氟苯咪唑、甲苯咪唑、丙氧苯唑和三氯苯唑）的液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜分析方法，飼料樣品用酸化乙腈直接提取，提取液用甲酸溶液稀釋后進(jìn)行分析，分析時用XBridgeTMC18色譜柱，以甲酸溶液-乙腈體系進(jìn)行梯度洗脫，MRM方式測定，基質(zhì)外標(biāo)法定量。8種苯并咪唑類藥物均在0.02 mg/L~10.0 mg/L范圍內(nèi)呈良好的線性關(guān)系，相關(guān)系數(shù)（r2）均不低于0.990，在飼料樣品中的檢出限為2.1 μg/kg~63.0 μg/kg。該方法分析單個樣品約需30 min，該方法適合飼料中8種苯并咪唑類藥物的同時分析。
豬組織中阿莫西林鈉的超高效液相色譜-電噴霧串聯(lián)質(zhì)譜的測定方法。經(jīng)乙腈-水（15/2，v/v）溶液脫脂脫蛋白，HLB固相萃取柱凈化，乙腈洗脫。超高效液相色譜-質(zhì)譜測定。本方法研究的阿莫西林鈉的線性范圍為0.01μg/mL~1μg/mL，線性相關(guān)系數(shù)0.9992~0.9995；在0.025mg/kg、0.05 mg/kg、0.1 mg/kg的3個添加水平的回收率在65.9±3.49%~73.2±3.95%；相對標(biāo)準(zhǔn)偏差在5.1%~6.5%；各組織的日內(nèi)變異系數(shù)在5.8%~7.8%，日間變異系數(shù)在5.1%~12.5%。方法檢出限0.01 μg/g，定量限為0.03 μg/g。
