史小紅 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
豬巨細(xì)胞病毒感染是由豬細(xì)胞巨化病毒 (poreineeytomegalovirus，PeMv)引物的一種豬傳染病，該病又稱(chēng)為豬包涵體鼻炎 (poreineeytomegalovirus-bodyrhinitis)，PCMv屬于疙疹病毒科，日疽疹病毒亞科，薔薇疤疹病毒屬，是獸醫(yī)發(fā)現(xiàn)的繼豬偽狂犬病病毒后發(fā)現(xiàn)的第二個(gè)豬疽疹病毒，所以又稱(chēng)為豬疙疹病毒2型。
豬細(xì)胞巨化病毒在形態(tài)結(jié)構(gòu)上屬于一般的雙鏈線狀DNA病毒，病毒粒子組成從內(nèi)到外分別為核蕊、衣殼及囊膜。核蕊常為均勻一致的圓形電子致密區(qū)，其形狀也有長(zhǎng)方形或啞鈴狀，核蕊直徑介于40一75納米之間。核髓的外圍是立體對(duì)稱(chēng)的正20面體衣殼，外觀呈六角形，核蕊加上衣殼稱(chēng)為核衣殼或裸露的病毒粒子，其直徑介于80一110納米之間。位于病毒粒子最外圍的是囊膜，一般是單層，偶爾也出現(xiàn)有雙層的情況。在包理和染色等處理過(guò)程中，很容易變形，進(jìn)而導(dǎo)致負(fù)染樣品中病毒顆粒的直徑和外形經(jīng)常出現(xiàn)不一致的情況，囊膜表面附有纖突，帶囊膜的完整病毒顆粒的直徑介于120一150納米之。跟其它疽疹病毒類(lèi)似，經(jīng)常也可見(jiàn)到?jīng)]有核芯或無(wú)囊膜的病毒顆粒，電鏡觀察顯示，感染細(xì)胞核內(nèi)僅見(jiàn)包有衣殼的核衣殼，在接近核膜的細(xì)胞質(zhì)小胞體內(nèi)，可觀察到被覆有囊膜的完整病毒粒子。
該病毒感染正常細(xì)胞后可使其細(xì)胞體積極度增大并達(dá)原來(lái)體積的6倍，該細(xì)胞內(nèi)的高爾基體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和線粒體、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體也同樣出現(xiàn)腫大，而在超薄切片中可見(jiàn)核內(nèi)出現(xiàn)巨大的呈結(jié)晶體樣排列的嗜堿性包涵體。在GeneBank上發(fā)布的與PcMV相關(guān)的基因序列共有聚合酶 (DPOL)基因序列、糖蛋白gB基因序列和MCP基因序列，其中聚合酶(DPOL)基因序列全長(zhǎng)s，024bp、糖蛋白gB基因序列全長(zhǎng)分為:58:和:580bp、而McP基因序列全長(zhǎng)劣4026bp，將以上基因序列與其它瘡疹病毒相對(duì)應(yīng)的序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)，PCMV與人疤疹病毒6型或7型的同源性最高。
因PCMV含有囊膜，用乙醚、氯仿等有機(jī)溶劑對(duì)其處理可使其喪失感染力。PCMV在50℃經(jīng)30min可失去活性。病毒懸液一60℃下保存2年以上仍有活性，在22℃下24h后的不再具有感染力，但在一30℃下，患病豬鼻豁膜組織的感染力可至少保持5個(gè)月。該病毒只在豬肺泡巨細(xì)胞培養(yǎng)上能良好地增殖，該細(xì)胞適用于對(duì)PCMV的分離和感染效價(jià)的測(cè)定，但由于該細(xì)胞經(jīng)常受到PRSsV和 PCMV在內(nèi)對(duì)的一些病毒的污染，故培養(yǎng)該病毒時(shí)必須使用無(wú)菌豬或SPF豬等的肺泡巨噬細(xì)胞。
此外，用己感染PCMV病毒的豬腎或攀丸直接做細(xì)胞帶毒培養(yǎng)時(shí)，則病毒以感染細(xì)胞為中心出現(xiàn)充分增殖，并產(chǎn)生細(xì)胞病變。 Bouil1ant等人[31利用輸卵管類(lèi)成纖維細(xì)胞探討PcMv的培養(yǎng)方式、增殖情況以及蝕斑的情況。具體試驗(yàn)結(jié)果如下:PCMV在類(lèi)成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)方式為:孔板上接種十倍倍比稀釋的病毒液，每個(gè)稀釋度重復(fù)兩次，31℃培養(yǎng)7天后換液，繼續(xù)培養(yǎng)14天后去除培養(yǎng)液，使用0.2%EDTA胰蛋白酶液消化細(xì)胞后，在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)。PCMV在類(lèi)成纖維細(xì)胞的增殖情況為:病毒接種的第4天出現(xiàn)感染價(jià)，毒價(jià)在第10天達(dá)最高;接毒后第2天開(kāi)始有核內(nèi)熒光抗原出現(xiàn)，7天后消失;此外在接毒后的第3天開(kāi)始有細(xì)胞質(zhì)內(nèi)的熒光抗原出現(xiàn)，11天后仍能觀察到熒光抗原;感染細(xì)胞在接毒后第2天通過(guò)HE染色可觀察到核內(nèi)開(kāi)始出現(xiàn)包涵體，全細(xì)胞在第5天后都可見(jiàn)包涵體，合胞體在第11天形成，體積為正常細(xì)胞的6倍。
PCMV在類(lèi)成纖維細(xì)胞上形成蝕斑的情況為:將含有中性紅的瓊脂覆蓋在接毒后第11天單層細(xì)胞上，第2天即觀察到直徑為0.2mm左右的紅色蝕斑。隨時(shí)間推移，色素從中心部位開(kāi)始消失，第21天后形成直徑約2mm周邊的紅色蝕斑。到目前為止對(duì)PCMV抗原特性研究得很少，在已報(bào)道的文獻(xiàn)中TajimaT等人曾通過(guò)ELIsA試驗(yàn)對(duì)7個(gè)國(guó)家感染了PcMv患豬的血清進(jìn)行檢測(cè)并發(fā)現(xiàn)，ChibaZ株與OFI、Hiroshima和ChibaC株存在很大差異，同時(shí)oFI株與Hiroshima株之間、ChibaC株與KagawaS株之間也存在差異，而英國(guó)的Hiroshima株與ChibaZ、OFZ、ChibaC及B6等株在血清學(xué)上也出現(xiàn)不同。綜上司一以得出PCMV抗原之間可能存在地區(qū)差異。
此外，本病毒與其他疤疹病毒也沒(méi)有發(fā)現(xiàn)有交差反應(yīng)的現(xiàn)象，進(jìn)一步揭示該病毒的抗原特異性很強(qiáng)。目前PCMV糖蛋白B已成為學(xué)術(shù)研究的熱點(diǎn)，對(duì)己公布的序列進(jìn)行分析發(fā)現(xiàn)該蛋白的序列長(zhǎng)度存在2580和2583bp兩種。囊膜蛋白gB做為一種必須蛋白，在所有疤疹病毒感染寄主的粘附，穿入，誘導(dǎo)細(xì)胞融合和病毒在細(xì)胞間的擴(kuò)散過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用，該蛋白同時(shí)具有具有良好的免疫保護(hù)性及免疫原性，為治療和免疫預(yù)防豬包涵體鼻炎提供了新路徑。
