趙剛 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)
流感病毒診斷的經(jīng)典方法為病毒分離鑒定，由于其操作程序繁雜，耗時(shí)費(fèi)力，因此不易普及，血凝(HA)和血凝抑制(Hl)試驗(yàn)是目前世界衛(wèi)生組織推薦的常規(guī)方法，最常用的是常量法和微量法。病毒中和實(shí)驗(yàn)(VN)也是一種經(jīng)典方法，其敏感性比Hl試驗(yàn)強(qiáng)，但在過(guò)去很少使用，因?yàn)槠洳僮鞣爆?，耗時(shí)費(fèi)力，近些年隨著現(xiàn)代病毒學(xué)技術(shù)(包括可培養(yǎng)流感病毒的細(xì)胞系和病毒滴度快速測(cè)定方法)的發(fā)展，才獲得廣泛使用。當(dāng)前病毒中和實(shí)驗(yàn)(VN)作為標(biāo)準(zhǔn)來(lái)評(píng)價(jià)其它新的檢測(cè)方法。近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)發(fā)展很快，例如PCR酶聯(lián)免疫分析 (PCR一 EIA)、熒光 pCR、多重 pCR及核酸體外擴(kuò)增 (NASBA)等技術(shù)均已應(yīng)用于流感病毒的快速診斷中，甚至可以用于強(qiáng)毒或弱毒監(jiān)測(cè)。
1971年瑞典的Engvan等人分別以纖維素和聚丙乙烯試管作為固相載體吸附抗原/抗體，建立了酶聯(lián)免疫吸附法(En即 meLinkedImmunosrbentAssay，簡(jiǎn)稱ELIsA)。1974年Volle:等人改用聚苯乙烯微量反應(yīng)板作為固相免疫吸附載體，使ELISA法成得以更為廣泛的應(yīng)用，使得用于抗原定位的酶標(biāo)記抗體技術(shù)發(fā)展成為液體標(biāo)本中微量物質(zhì)的測(cè)定方法，并逐漸成為抗原抗體檢測(cè)中最為常用的一種方法。ELISA方法主要有3種:間接ELISA法、阻斷ELISA法和雙抗體夾心 ELISA法，其中間接ELISA法、阻斷ELISA法應(yīng)用于血清學(xué)檢測(cè)抗體，雙抗體夾心ELISA法則應(yīng)用于抗原的檢測(cè)。由于ELISA方法具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)迅速和非放射性以及可以批量測(cè)定等諸多優(yōu)點(diǎn)，使得ELISA方法得到了越來(lái)越廣泛的應(yīng)用。酶聯(lián)免疫吸附法也是流感病毒流行病學(xué)普查及早期快速診斷的最有效和最實(shí)用的方法。
免疫膠體金技術(shù) (ImmuneColloidalgoldteehnique，ICG)就是免疫金標(biāo)記技術(shù)(Immune-goldlabellingteehnique)。自 1971年創(chuàng)立膠體金標(biāo)一記技術(shù)以來(lái)，膠體金被引入免疫化學(xué)中，現(xiàn)己經(jīng)發(fā)展為一項(xiàng)重要的免疫標(biāo)記技術(shù)。許多學(xué)者證實(shí)膠體金不僅可以作為探針進(jìn)行細(xì)胞表而和細(xì)胞內(nèi)多糖、蛋白質(zhì)、多膚，而且還可以對(duì)抗原、激素、核酸等生物大分子的精確定位，也可以用于常規(guī)的免疫診斷，進(jìn)行免疫組織化學(xué)定位。由于膠體金標(biāo)記免疫技術(shù)具有快捷、準(zhǔn)確、特異性強(qiáng)、敏感性高的特點(diǎn)，從而得到廣泛應(yīng)用。
