臧德月 吉林大學(xué)
目前，有關(guān)HEV的研究資料，國(guó)內(nèi)外的畜牧報(bào)道不是很多。除HEV的流行病學(xué)調(diào)查研究和檢測(cè)方法外，國(guó)外學(xué)者有研究其感染途徑的報(bào)道。通過(guò)腦內(nèi)(i.o.)、鼻腔(i.n.)、腹腔(i.P.)、皮下 (s.c.)、靜脈 (i.v.)和口服(oral)六種不同的接種途徑對(duì)不同日齡的小鼠接種HEV67N，結(jié)果發(fā)現(xiàn)試驗(yàn)組小鼠死亡時(shí)間先后順序是1.0.，i.n.，s.c.，i:P，i.v.和oral，接種不同日齡小鼠的死亡時(shí)間先后順序是1周齡、2周齡、4周齡和8周齡，說(shuō)明HEv的嗜神經(jīng)性與小鼠的日齡和接種途徑有關(guān)，通過(guò)接種本源動(dòng)物試驗(yàn)表明，母源抗體可以保護(hù)仔豬不受該病原的侵害。
HEV標(biāo)準(zhǔn)毒株能在乳鼠的腦內(nèi)感染，Yagami通過(guò)不同途徑接種不同日齡的小鼠研究了該毒株的致病性，大腦內(nèi)接種后，3一5天的小鼠死于腦脊髓炎，伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，但是，通過(guò)鼻腔內(nèi)，腹膜內(nèi)和皮下接種的，小鼠在20天及以后證明具有抵抗力。
Hirano報(bào)告說(shuō)HEV67標(biāo)準(zhǔn)毒株能成功的在已經(jīng)建立的豬細(xì)胞系(sK一K細(xì)胞培養(yǎng))傳播和噬斑試驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)用SK一K病毒培養(yǎng)物經(jīng)過(guò)腦內(nèi)接種4周齡小鼠脊髓炎死亡率與接種劑量有很大關(guān)系。4周齡的大鼠在經(jīng)過(guò)ic，in，sc，iP或者靜脈注射同樣死亡，并伴有中樞神經(jīng)系統(tǒng)癥狀，但是，通過(guò)同種劑量sc途徑接種相比于iP，iv途徑接種早死亡幾天。通過(guò)直接接種與坐骨神經(jīng)或者腳趾，病毒首先在腰脊髓段分離到，隨后在腦內(nèi)。依據(jù)這些結(jié)果，陽(yáng)性抗原神經(jīng)元最早在腰脊髓段，隨后在大腦皮層，海馬，腦橋和小腦。這些發(fā)現(xiàn)揭示病毒傳播到中樞神經(jīng)系統(tǒng)是通過(guò)神經(jīng)途徑而不是經(jīng)由血液流。
1周齡的大鼠接種劑量從2*10^3—2*10^6 PFu除了口服途徑外都死亡了，接種劑量從2PFu—2*10^2 PFu通常能使接種的大多數(shù)死亡，但是口服接種的大鼠，即使2*l0^5 PFu僅能使五只中的兩只死亡，2*10^4 PFu則一只也不能致死。全部的大鼠在接種后3一7天內(nèi)死亡。2周齡的大鼠結(jié)果大致與上述描述相一致。通過(guò)iv接種2*10^3 PFu的劑量能使五只中的三只死亡，但是當(dāng)劑量為200PFU時(shí)通過(guò)iv接種的不會(huì)感染發(fā)病;通過(guò)口服接種 2*l0^6 PFu的劑量時(shí)沒有發(fā)生死亡。
4周齡的大鼠表現(xiàn)出或多或少的敏感性，例如，當(dāng)接種劑量為2*10^3 PFU左右時(shí)，通過(guò)in，iP，sc或iv途徑接種時(shí)，只能使少數(shù)死亡，而且此外，死亡的時(shí)間也從4一12天不等。大鼠通過(guò)ic接種2x10乍FU的病毒。結(jié)果顯示病毒在接種一天后的腦內(nèi)被檢測(cè)到，病毒的效價(jià)成指數(shù)增長(zhǎng)，在3一4天達(dá)到最大值大于 107PFu/0.29，這個(gè)時(shí)期發(fā)生中樞神經(jīng)癥狀。病毒首次分離到時(shí)是在2天的脊髓內(nèi)，病毒在腦不檢測(cè)到是在第4天，在1到4天內(nèi)沒有在肝臟，脾臟和血液內(nèi)檢測(cè)到病毒。
8周齡的大鼠表現(xiàn)出較少的敏感性，當(dāng)接種劑量為2*10^6 PFu時(shí)，通過(guò)iP和iv途徑接種的沒有明顯的效果，當(dāng)接種劑量為2*10^4 PFU時(shí)，通過(guò)in和Sc途徑只能致死一部分大鼠，當(dāng)通過(guò)ic途徑接種時(shí)，依然能夠致死所有的大鼠，但是當(dāng)接種200PFU劑量時(shí)能使五只中的三只死亡。死亡時(shí)間在接種后4一11天內(nèi)發(fā)生，但是通過(guò)in接種的比通過(guò)S。和ic接種的平均死亡時(shí)間會(huì)長(zhǎng)一些。
通過(guò)各種途徑(ie，in，ip，se，iv和oral)接種l，2，4和8周齡的大鼠結(jié)果顯示感染的敏感性隨著年齡的增長(zhǎng)在下降。ic途徑是最大成功產(chǎn)生疾病的，oral途徑是最小的。隨著年齡增長(zhǎng)感染力逐漸降低通過(guò)口服途徑與先前Hirano的觀察的另一種冠狀病毒(小鼠肝炎病毒)很相似，這種現(xiàn)象的解釋有可能是在最前2周鼠的胃內(nèi)的PH值從5.5下降到2.沃通過(guò)ic接種后，HEV抗原通過(guò)免疫組織化學(xué)檢測(cè)到在腦和脊髓的大號(hào)神經(jīng)元發(fā)現(xiàn)，但是沒有在室管膜細(xì)胞，脈絡(luò)叢或者是其他的膠質(zhì)細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)，該結(jié)構(gòu)揭示了病毒是在中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)傳播而不是經(jīng)由中央管或者血流。
為了解釋HEV67N傳播是通過(guò)神經(jīng)通路或者是周圍組織血流進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng)，大鼠通過(guò)接種右腳趾，致命的感染通過(guò)切斷右側(cè)坐骨神經(jīng)在6個(gè)小時(shí)內(nèi)而不是12個(gè)小時(shí)后發(fā)生，而且病毒直接接種右側(cè)坐骨神經(jīng)后，在第二天從脊髓的尾部開始繁殖，在第三天到達(dá)脊髓的前部和腦內(nèi)。
研究與腦脊髓炎病毒相似的具有嗜神經(jīng)性的偽狂犬病病毒的繁殖與傳播，利用新生小鼠的背根神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，包含神經(jīng)細(xì)胞和非神經(jīng)元細(xì)胞，HEV能感染神經(jīng)細(xì)胞但是不能感染非神經(jīng)元細(xì)胞，相反偽狂犬病毒能感染這兩種細(xì)胞，結(jié)果顯示HEV和PRV病毒在神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)和神經(jīng)細(xì)胞之間通過(guò)神經(jīng)細(xì)胞的微管和中間絲進(jìn)行傳播的，這些病毒可能通過(guò)快速的軸突流在細(xì)胞體和神經(jīng)元軸索末端之間傳播的。
病毒究竟是如何感染并傳播到中樞神經(jīng)系統(tǒng)，目前尚不清楚，但是我們可以假設(shè)可能至少有以下幾條途徑:(l)病毒首先在呼吸道豁膜和扁桃體內(nèi)復(fù)制，然后沿周邊神經(jīng)向三叉神經(jīng)侵入大腦皮質(zhì);(2)病毒經(jīng)皮膚損傷部位的外周神經(jīng)上行經(jīng)脊髓、延髓、腦干到大腦皮質(zhì);(3)病毒經(jīng)消化道感染后經(jīng)前腸系膜神經(jīng)叢或后腸系膜神經(jīng)叢沿植物性神經(jīng)途徑傳向大腦。
