豬瘟（classicalswinefever,CSF）是由豬瘟病毒（classicalswinefevervirus，CSFV）引起豬的一類具有高度危害性的傳染病，國際獸疫局將其確定為A類傳染病,也是我國出入境檢疫的一類傳染病，具有高度接觸性、傳播快速的臨床特點。該病主要流行于亞洲、歐洲、南美洲，是世界養(yǎng)豬業(yè)最重要的疫病之一。CSFV是一種單股正鏈RNA病毒，屬于黃病毒科瘟病毒屬。目前CSFV的診斷方法有：
1病毒分離
病毒分離是體外檢測感染性豬瘟病毒最特異的方法，被認為是確診豬瘟的“金標準”。病毒可以從組織、全血中分離，但是對于豬瘟的早期診斷，全血或血漿比白細胞更為敏感。最常用于豬瘟病毒分離的細胞為豬腎細胞系（PK15或SK6）或豬睪丸細胞（ST）。雖然病毒分離和鑒定周期長、操作繁瑣、對操作者技術(shù)要求較高，但在豬瘟爆發(fā)時它仍然是對豬瘟進行確診的必不可少的檢測方法。
2血清學(xué)診斷
目前最常用的檢測豬瘟病毒的血清學(xué)方法有病毒中和試驗、瓊脂擴散試驗、補體結(jié)合反應(yīng)試驗、間接血凝試驗、ELISA、免疫熒光試驗，其中酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)以其敏感、準確、快速、簡單等優(yōu)點已經(jīng)成為國內(nèi)外動物疫病常規(guī)的診斷技術(shù)，是進行大規(guī)模樣品檢測的優(yōu)選方法，結(jié)合單克隆抗體應(yīng)用使其具有更大的優(yōu)勢。
1990年Leforban等建立了一種ELISA方法，能夠區(qū)分BVDV、BDV以及CSFV抗體。這個方法對于BVDV/BDV高流行地區(qū)CSFV的檢測非常有意義。
2006年劉建文等用純化的3株CSFV特異性單抗1E2、3B7和4B6直接包被酶標板，然后用純化兔抗CSFVIgG作為第二抗體建立了AC-ELISA方法，保證了方法的特異性和敏感性，而且操作便捷、省時，易于推廣。
3分子生物學(xué)診斷
近年來，分子生物學(xué)檢測技術(shù)中PCR技術(shù)發(fā)展迅速，該技術(shù)應(yīng)用于豬瘟病毒的檢測，使豬瘟的檢測變得快速、準確，其中有反轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈式反應(yīng)（reversetran-scrip-tion-polymerasechainreaction,RT-PCR）、巢式PCR（nest-PCR）、熒光定量PCR（FQ-PCR）、多重PCR（Multi-plex-PCR）、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)(loop-mediatedisothermalamplification,LAMP)。PCR技術(shù)越來越多的應(yīng)用于CSFV間以及CSFV與其它瘟病毒的檢測與鑒別診斷。
2001年Barlic-Maganja等建立了檢測并鑒別BVDV和CSFV的單管單酶RT-PCR診斷方法，縮短了檢測時間，提高了病毒的檢出率。
2006年李艷等人利用豬瘟病毒基因組5′端相對保守，但包含強毒與弱毒的差異性位點，可以作為強毒與弱毒分子鑒別診斷的靶區(qū)域，建立了一種能快速區(qū)分豬瘟強毒和弱毒的特異而敏感的RT-復(fù)合套式PCR（RT-nPCR）分子鑒別診斷方法，可對豬瘟病毒感染進行早期快速準確診斷，從而防止豬瘟感染的蔓延，并及時發(fā)現(xiàn)新的豬瘟病毒流行毒株，為制定豬瘟防制策略提供了依據(jù)。
2007年朱小甫等根據(jù)Shimen株（AF092448）基因序列設(shè)計了2對引物，優(yōu)化了豬瘟病毒（CSFV）的RT-nestedPCR檢測方法，并對所優(yōu)化的RT-nestedPCR特異性進行了檢驗。經(jīng)實驗檢驗優(yōu)化的檢測方法靈敏度高，特異性強。
環(huán)介導(dǎo)等溫擴增方法是日本學(xué)者Notomi等在2000年發(fā)明的一項恒溫核酸擴增新技術(shù),該技術(shù)特異性強、靈敏度高、成本低廉、不需要PCR儀，僅需要一個恒溫水浴鍋即可完成核酸的擴增，特別適合基層部門應(yīng)用。2009年Chen等利用RT-LAMP、RT-PCR和常規(guī)病毒分離方法檢測豬瘟疑似病例血液、扁桃體樣本中的CSFV，結(jié)果CSFV的陽性率分別為89%、78%及71%，與RT-PCR和常規(guī)病毒分離方法比較表明RT-LAMP方法具有高度敏感性。
2007年史子學(xué)等建立了一種CSFV兩步法熒光定量RT-PCR檢測方法，參考涵蓋CSFV三個基因型的25株CS-FV基因組5′NTR序列設(shè)計了一對簡并引物和一條Taq-Man探針，引物、探針序列和參考的25株CSFV毒株的相應(yīng)序列完全匹配。并且所檢測的54份陽性CSF臨床樣品中所含病毒株屬于CSFV基因1.1、2.1、2.2、2.3亞型，表明建立的熒光定量RT-PCR方法可以特異的檢測較廣的CSFV基因?，F(xiàn)在熒光定量PCR還沒有成為OIE認可的CSFV檢測標準方法，但是隨著熒光定量RT-PCR方法在CSF臨床病料檢測方面的不斷應(yīng)用，熒光定量RT-PCR方法將會成為在CSF流行病學(xué)調(diào)查上使用的可靠方法。
綜上所述，病毒分離存在診斷周期長、操作繁瑣、檢出率低等缺點；常規(guī)的血清學(xué)試驗又都存在一定的血清學(xué)交叉反應(yīng)；抗原抗體反應(yīng)的檢測技術(shù)敏感性不夠高、檢出時間晚，有一定的局限性，熒光定量PCR，敏感性超過病毒分離，特異性略低于病毒分離，經(jīng)研究人員比較RT-nPCR的檢出率最高，表明RT-nPCR是CSFV感染早期診斷的最好方法。可以看出分子生物學(xué)技術(shù)手段將越來越多的被應(yīng)用于豬瘟病毒的診斷中。
（山西省太谷縣畜牧獸醫(yī)中心，郝永正）
