茹仙古麗?木明 肖開提 新疆維吾爾自治區(qū)衛(wèi)生監(jiān)督所 冬不拉提 新疆特斯克縣畜牧局

1發(fā)病情況及臨床癥狀

    昌吉市某牛場(chǎng)2011年3月中旬起犢牛開始發(fā)病，不同日齡的都有，臨床癥狀基本相同，體溫在39℃~40℃之間，聽診心律基本正常，呼吸明顯加快，聽診肺部呈羅音、濕羅音，有咳嗽癥狀，鼻液由漿液性到化膿性各階段都有，食欲不佳，精神沉郁，病程多在5~15d不等。牛場(chǎng)獸醫(yī)根據(jù)以往的經(jīng)驗(yàn)采取了運(yùn)用常規(guī)抗生素進(jìn)行抗菌消炎和強(qiáng)心補(bǔ)液等治療方法，后期換用幾種較好的抗生素，但治療效果都不佳，有7頭犢牛先后死亡。剖檢死亡犢牛都有肺臟與胸腔粘連，肺部有大小不等鈣化灶，肝臟色黃質(zhì)脆，心臟病變不明顯，消化道正常，筆者對(duì)送檢病料進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)室診斷，通過病原菌分離、培養(yǎng)及生化鑒定，結(jié)合流行病學(xué)、臨床癥狀，確診為肺炎鏈球菌和沙門氏桿菌混合感染。

2細(xì)菌學(xué)鑒定

2.1鏡檢

    在無菌環(huán)境中取病料各臟器作觸片固定后，進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢。

2.2細(xì)菌的分離培養(yǎng)

    無菌取病料各臟器，接種于普通肉湯培養(yǎng)基和厭氧肝湯培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)24h觀察并進(jìn)行鏡檢，將普通肉湯培養(yǎng)基中的培養(yǎng)物分別接種于普通培養(yǎng)基，麥康凱培養(yǎng)基和鮮血瓊脂培養(yǎng)基上經(jīng)37℃培養(yǎng)24h分離培養(yǎng)，觀察培養(yǎng)特性并進(jìn)行染色鏡檢，挑區(qū)取兩個(gè)菌株的兩個(gè)菌落，分別接種于普通肉湯培養(yǎng)基上，37℃培養(yǎng)24h培養(yǎng)，進(jìn)行純培養(yǎng)，并備用。

2.3動(dòng)物試驗(yàn)

    將上述兩株菌的純培養(yǎng)物鏡檢，按0．2ml／只，分別腹腔注射兩組小白鼠(每組兩只，16g左右，由新疆醫(yī)科大學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心提供)，并設(shè)對(duì)照組進(jìn)行觀察。

2.4生化實(shí)驗(yàn)

    分別取上述兩株致病菌在普通瓊脂培養(yǎng)物進(jìn)行氧化酶試驗(yàn)，結(jié)果都為陰性。將兩株培養(yǎng)物分別接種于ATBEXPESSION(細(xì)菌自動(dòng)鑒定及藥敏測(cè)試儀)RapidID32STREP快速鏈球菌鑒定試條上37℃培養(yǎng)4h和ID32ENG試條上37℃培養(yǎng)24h。

2.5血清型鑒定

    用沙門氏菌屬診斷血清(中國(guó)生物技術(shù)集團(tuán)公司蘭州生物制品研究所提供，國(guó)藥準(zhǔn)字S10820102)進(jìn)行進(jìn)行血清型鑒定。

2.6藥敏試驗(yàn) 

    取上述兩株革蘭氏陰性致病菌的純培養(yǎng)物混合作藥敏試驗(yàn)(藥敏紙片由北京天壇藥物生物技術(shù)開發(fā)公司提供，批號(hào)200404)。藥敏試驗(yàn)根據(jù)美國(guó)臨床標(biāo)準(zhǔn)委員會(huì)（NCCLS）推薦的K—B瓊脂法進(jìn)行，試驗(yàn)所選用藥物包括下列抗生素：氨芐西林，阿莫西林/克拉維酸，頭胞噻吩，頭胞噻肟，慶大霉素，環(huán)丙沙星，先鋒霉素Ⅵ、復(fù)達(dá)欣、丁胺卡那霉素、奧復(fù)欣、青霉素，鏈霉素，利福平，復(fù)方新諾敏。藥敏結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)參照NCCLS手冊(cè)（2005版）。

3結(jié)果

3.1鏡檢結(jié)果

    在組織涂片中可見卵圓形成對(duì)或短鏈狀，平面相對(duì)，成雙排列有明顯莢膜的革蘭氏陽性菌和直形或略彎，呈單個(gè)或成雙排列，沒有芽孢和莢膜的革蘭氏陰性短小桿菌以下簡(jiǎn)稱1號(hào)菌株和2號(hào)菌株。

3.2細(xì)菌的分離培養(yǎng)

    病料經(jīng)普通培養(yǎng)基37℃培養(yǎng)18~20h后，有凸起、光滑、濕潤(rùn)、半透明、邊緣整齊的中等偏大菌落和一些生長(zhǎng)不良的細(xì)小菌落。在麥康凱培養(yǎng)基上可見中等大小圓整、扁平或突起的半透明濕潤(rùn)菌落和露滴狀、帽針頭大小，呈桔黃色的菌落。在鮮血瓊脂培養(yǎng)基上可見灰白色、不透明、圓而隆起、邊緣整齊或不規(guī)則、大而濕潤(rùn)但不溶血的菌落和白色、小圓形、表面光滑、邊緣整齊，微隆起有β-溶血環(huán)菌落。普通肉湯培養(yǎng)基呈均勻混濁液體，對(duì)兩株菌分別進(jìn)行革蘭氏染色鏡檢可見同樣品鏡檢中見到的兩株菌。

3.3動(dòng)物試驗(yàn)

    2個(gè)試驗(yàn)組4只小鼠均在12~24h內(nèi)死亡，剖檢死亡小鼠，臟器分別涂片，經(jīng)革蘭氏染色鏡檢，可見與注射培養(yǎng)物相同的細(xì)菌，對(duì)照小鼠沒有死亡。

3.4生化試驗(yàn)

    對(duì)分離到的2株細(xì)菌的培養(yǎng)物分別接氧化酶測(cè)定試驗(yàn)，接種于細(xì)菌自動(dòng)鑒定RapidID32STREP快速鏈球菌鑒定試條上1號(hào)菌株自動(dòng)鑒定儀讀出結(jié)果為肺炎鏈球菌，接種于細(xì)菌自動(dòng)鑒定ID32NG試條上2號(hào)菌株自動(dòng)鑒定儀讀出結(jié)果為沙門氏菌，它們主要的生化試驗(yàn)指標(biāo)結(jié)果如下表

3.5血清型鑒定

    用沙門氏菌屬診斷血清，結(jié)果為2號(hào)菌株的血清型均為都柏林沙門氏菌（1，9，12<vi>:g,p:--）。

3.6藥敏試驗(yàn)

    藥敏結(jié)果是先鋒霉素Ⅵ、復(fù)達(dá)欣、丁胺卡那霉素、奧復(fù)欣效果好，其他藥物效果不明顯。

4討論

    沙門氏菌病又名副傷寒（Paratyphoid）,是由沙門氏菌所引起的可以傳染給人的動(dòng)物病，特征為敗血癥、毒血癥或胃腸炎，病畜常常發(fā)生腹瀉，孕畜一般引起流產(chǎn)。規(guī)模場(chǎng)犢牛集中喂養(yǎng)，本病的發(fā)病率也高。病畜和帶菌畜是本病的傳染源。流行因素有以下幾點(diǎn)：（1）犢牛沒有食入足夠量的初乳，斷奶太早；（2）長(zhǎng)途販運(yùn)；（3）畜舍衛(wèi)生條件不良，過分擁擠；（4）飼料和飲水不足；（5）患有其他內(nèi)、外、產(chǎn)科病或非致病性病毒病，促使帶菌牛發(fā)??；（6）對(duì)呈現(xiàn)腹瀉、發(fā)熱癥狀而沒有確定其病因的病牛未及時(shí)隔離，死牛處理不當(dāng)，或?qū)π乱M(jìn)的家畜沒有隔離檢疫；（7）飼料保存不當(dāng)，被嚙齒動(dòng)物侵入，以及水源保護(hù)不當(dāng)，被病原菌污染；（8）氣候聚變，家畜沒有適當(dāng)?shù)呐锶Α７窝祖溓蚓⊿.pneumoniae）為人的大葉性肺炎、腦膜炎的病原體，也可致畜的敗血病或肺炎。存在于上呼吸道內(nèi)的肺炎球菌，在集體抵抗力降低時(shí)，即可發(fā)生內(nèi)源性感染，亦可發(fā)生外源性傳染。家畜在產(chǎn)仔季節(jié)多發(fā)，新生畜容易發(fā)生敗血病，該牛場(chǎng)本次犢牛發(fā)病，可能是犢牛斷奶太早，畜舍衛(wèi)生條件不良，過分擁擠，對(duì)呈現(xiàn)腹瀉、發(fā)熱癥狀而沒有確定其病因的病牛未及時(shí)隔離，而感染沙門氏菌，沙門氏菌又使?fàn)倥＜w抵抗力降低，從而繼發(fā)感染肺炎鏈球菌。

    由于治療沙門氏菌病和肺炎鏈球菌病的主要治療藥物為呋喃唑銅、青霉素、新霉素、氨比西林和磺胺類藥物而上述兩種菌對(duì)上述藥物有較強(qiáng)的耐藥性，本實(shí)驗(yàn)室的藥敏結(jié)果是先鋒霉素Ⅵ、復(fù)達(dá)欣、丁胺卡那霉素、奧復(fù)欣效果好，其他藥物效果不明顯，該牛場(chǎng)獸醫(yī)人員只是盲目的根據(jù)經(jīng)驗(yàn)四環(huán)素、頭孢類藥物進(jìn)行治療，而沒有開展配合護(hù)理和其他支持療法，使得犢牛的病情加劇。因此，最好根據(jù)藥敏試驗(yàn)結(jié)果選用敏感的抗菌藥物進(jìn)行治療，避免同一藥物連續(xù)使用，方可避免一些不必要的損失。