公豬在豬細(xì)小病毒的傳播中也起著重要作用。McAdarogh和Ahacher等 (1985)應(yīng)用Hl對786頭公豬的PPV抗體檢測表明:6月齡以下的公豬其血清學(xué)陽性率為48.1%,7一11月齡公豬其血清學(xué)陽性率為59.0%,而超過12月齡公豬其血清學(xué)陽性率為81.7%,說明隨著公豬年齡的增加,公豬感染的機(jī)率也會增強(qiáng)。對基層獸醫(yī)來說是經(jīng)常會遇見的病毒。
豬細(xì)小病毒的常用的檢測方法主要包括病毒的分離與鑒定、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、PCR技術(shù)、血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。而豬場土壤中檢測方法報(bào)道的比較少,主要有細(xì)菌分離培養(yǎng)法、生理生化鑒定、PCR、Real一PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)。細(xì)菌分離培養(yǎng)法,生理生化鑒定試驗(yàn)需要很長時(shí)間,PCR,Real一PCR比細(xì)菌分離培養(yǎng)法和生理生化鑒定試驗(yàn)快,且能檢測出土壤中很難培養(yǎng)或不能培養(yǎng)的微生物,但需要較貴的儀器設(shè)備,而LAMP技術(shù)相對PCR等技術(shù),其特異性強(qiáng),恒溫操作,設(shè)備簡單。
環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(Loop一 mediatedisothermalamplifieation,LAMp),是由日本科學(xué)家Notomi等于2000年發(fā)明的一種體外恒溫核酸擴(kuò)增方法伽 otomietal.,2000)。其特點(diǎn)是利用一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶 (BstDNAPolymerase)在恒溫條件下(60℃一65℃)反應(yīng)30一60min,即可完成核酸的大量擴(kuò)增,不到111的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增效率可以達(dá)到10的9次方至10次方個(gè)數(shù)量級。
LAMP反應(yīng)包括非循環(huán)和循環(huán)兩個(gè)階段。首先是非循環(huán)階段,DNA樣品在95℃預(yù)變性解鏈為單鏈后在鏈置換DNA聚合酶作用下于65℃左右進(jìn)行反應(yīng),但有些微生物的DNA是單鏈,所以就不需要 95OC預(yù)變性,只需恒溫條件就可以完成其反應(yīng),其操作簡單,迅速。
