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豬細(xì)小病毒病的介紹和基本檢測方法

發(fā)布時(shí)間:2012-03-01 07:00    作者:yizhiinfo    來源:畜牧人才網(wǎng)    查看:

趙俊 華中農(nóng)業(yè)大學(xué)


    豬細(xì)小病毒普遍存在于世界各地,在己報(bào)道的豬群中呈地方流行性。1989年Wrathall等對英國765個(gè)豬場進(jìn)行5年的血清學(xué)調(diào)查表明:在測試群體中,有陽性的豬場占92%,其中所有樣品都是陽性的豬場占55%,陰性和陽性共存的豬場占37%,而陰性豬場只有8%。PPV不僅能通過胎盤傳染給胎兒,也可通過消化道和呼吸道感染PPV,生殖道傳播PPV也在臨床得到證實(shí)。種豬同樣也是豬細(xì)小病毒的主要傳染源。同樣Wrathan等 (1989)對英國不同豬場的血清學(xué)檢測結(jié)果表明:公豬的陽性率為44%,后備母豬的陽性率為54%,經(jīng)產(chǎn)母豬的陽性率最高為81%,說明它們之間的差異很大。


    公豬在豬細(xì)小病毒的傳播中也起著重要作用。McAdarogh和Ahacher等 (1985)應(yīng)用Hl對786頭公豬的PPV抗體檢測表明:6月齡以下的公豬其血清學(xué)陽性率為48.1%,7一11月齡公豬其血清學(xué)陽性率為59.0%,而超過12月齡公豬其血清學(xué)陽性率為81.7%,說明隨著公豬年齡的增加,公豬感染的機(jī)率也會增強(qiáng)。對基層獸醫(yī)來說是經(jīng)常會遇見的病毒。


    豬細(xì)小病毒的常用的檢測方法主要包括病毒的分離與鑒定、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)、PCR技術(shù)、血凝抑制試驗(yàn)、中和試驗(yàn)、凝膠擴(kuò)散試驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合試驗(yàn)等。而豬場土壤中檢測方法報(bào)道的比較少,主要有細(xì)菌分離培養(yǎng)法、生理生化鑒定、PCR、Real一PCR、環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增技術(shù)(LAMP)。細(xì)菌分離培養(yǎng)法,生理生化鑒定試驗(yàn)需要很長時(shí)間,PCR,Real一PCR比細(xì)菌分離培養(yǎng)法和生理生化鑒定試驗(yàn)快,且能檢測出土壤中很難培養(yǎng)或不能培養(yǎng)的微生物,但需要較貴的儀器設(shè)備,而LAMP技術(shù)相對PCR等技術(shù),其特異性強(qiáng),恒溫操作,設(shè)備簡單。


    環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增法(Loop一  mediatedisothermalamplifieation,LAMp),是由日本科學(xué)家Notomi等于2000年發(fā)明的一種體外恒溫核酸擴(kuò)增方法伽  otomietal.,2000)。其特點(diǎn)是利用一種具有鏈置換活性的DNA聚合酶  (BstDNAPolymerase)在恒溫條件下(60℃一65℃)反應(yīng)30一60min,即可完成核酸的大量擴(kuò)增,不到111的時(shí)間內(nèi)擴(kuò)增效率可以達(dá)到10的9次方至10次方個(gè)數(shù)量級。 


    LAMP反應(yīng)包括非循環(huán)和循環(huán)兩個(gè)階段。首先是非循環(huán)階段,DNA樣品在95℃預(yù)變性解鏈為單鏈后在鏈置換DNA聚合酶作用下于65℃左右進(jìn)行反應(yīng),但有些微生物的DNA是單鏈,所以就不需要 95OC預(yù)變性,只需恒溫條件就可以完成其反應(yīng),其操作簡單,迅速。

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