涂攀 華中農業(yè)大學
豬細小病毒病是由豬細小病毒引起的以初產母豬發(fā)生流產、不孕、產死胎、畸形胎、木乃伊胎等為特征的豬的主要繁殖障礙性疾病之一。該病廣泛存在于世界各地并在大多數豬場流行，嚴重地影響著畜牧業(yè)的發(fā)展，這種病毒在環(huán)境中可存活數月之久，且對大多數消毒劑都具有抵抗力。正是因為這個原因，這種病分布非常廣泛，且很難根除。
研究利用環(huán)介導等溫擴增技術和豬細小病毒高保守的VPZ基因設計特異性引物，建立了快速方便的豬細小病毒臨床檢測方法?？梢詮耐寥罉悠分袡z測出0.002個TCIDso。
在LAMP反應體系中，引物濃度、BSA濃度、dNTPs濃度、DNA聚合酶、溫度等都影響著PCR反應結果。為此本研究對其重要因素進行了探討。其中最主要的因素之一是否添加BSA，土壤中微生物的種類多，雖然用基因組試劑盒提取的DNA比傳統方法含的雜質少些，但在模板中加了BAS比沒有加的更敏感些。BSA的一個可能作用機制是作用于多酚體系，腐殖酸、蛋白質，從土壤提取的DNA中常含有內源的多酚類化合物，它可與相應的蛋白質結合，致使酶失活，影響其結果。而BSA可以通過其上富含賴氨酸的陽離子，它可與多酚化合物的陰離子相互作用，或是通過疏水相互作用力消除內源的多酚類化合物，而起到消除多酚化合物與蛋白質的作用，即阻止它們與酶結合，從而提高酶的活性，以最終對LAMP反應起到改善的作用。
在實驗中，我們建立了一個特異性強、敏感性高的檢測土壤中豬細小病毒的方法，實驗數據證明該方法比建立的PCR方法更敏感;對來自湖北省18個豬場的92份土壤樣品，進行土壤基因組的檢測，分別用PCR方法和LAMP方法進行檢測。LAMP檢測出14份(巧.23%)豬細小病毒陽性，而PcR僅檢測出10份(10.87%)陽性。
