苑學(xué) 吉林大學(xué)
T-RFLP 技術(shù)是一種以分子系統(tǒng)學(xué)原理為基礎(chǔ)的研究微生物種群多樣性的現(xiàn)代分子生物學(xué)技術(shù)，在 DNA 水平上通過對特定核酸片段長度多態(tài)性的測定來分析比較特定環(huán)境內(nèi)微生物群落結(jié)構(gòu)。此技術(shù)應(yīng)用簡便、快捷，而且可以通過熒光標(biāo)記產(chǎn)生的波峰面積，對環(huán)境中細(xì)菌的數(shù)量進(jìn)行半定量分析，但其缺點(diǎn)是，只能對微生物鑒別到科或?qū)俚募墑e，不能鑒別到種，所以獸醫(yī)將 T-RFLP 技術(shù)和熒光定量 PCR 相結(jié)合，對肉牛在亞急性瘤胃酸中時(shí)瘤胃微生物區(qū)系進(jìn)行分析。
從T-RFLP 和熒光定量 PCR 結(jié)果可以看出，pH5.2～5.5（中度亞急性瘤胃酸中毒）、5.6～5.8（輕度亞急性瘤胃酸中毒）和 5.9～6.8（健康）相比較，纖維分解菌如，白色瘤胃球菌數(shù)量顯著減少（P<0.05），而黃色瘤胃球菌數(shù)量變化不明顯（P>0.05），產(chǎn)琥珀酸絲狀桿菌數(shù)量顯著增加（P<0.05）；淀粉分解菌如，嗜淀粉瘤胃桿菌、普雷沃氏菌以及多底物發(fā)酵菌溶纖維丁酸弧菌數(shù)量顯著增加（P<0.05），但牛鏈球菌數(shù)量變化不明顯（P>0.05）；乳酸產(chǎn)生菌只有乳酸桿菌數(shù)量顯著增加（P<0.01），乳酸利用菌，埃氏巨型球菌數(shù)量顯著增加（P<0.05）和（P<0.01），但反芻月形單胞菌數(shù)量顯著減少（P<0.01），以上的試驗(yàn)結(jié)果可以證明，當(dāng)肉牛采食大量精料時(shí)，使纖維降解菌的數(shù)量減少，增加淀粉分解菌的數(shù)量，對乳酸利用菌---反芻月形單胞菌影響較大。
此時(shí) pH5.2～5.5 和 5.6～5.8 組乳酸生成菌---乳酸桿菌和乳酸分解菌---埃氏巨型球菌數(shù)量都增加，無法確定是乳酸蓄積或揮發(fā)性脂肪酸蓄積引起 pH 值降低，所以本試驗(yàn)又對瘤胃揮發(fā)性脂肪酸和乳酸濃度進(jìn)行測定，發(fā)現(xiàn)乙酸濃度顯著減少（P<0.05），丙酸和丁酸濃度變化不顯著（P<0.05），而乳酸濃度卻顯著增加（P<0.01），因此可以證實(shí)，本試驗(yàn)中肉牛亞急性瘤胃酸中毒是由乳酸生成菌數(shù)量增加、主要乳酸利用菌之一的反芻月形單胞菌數(shù)量減少，引起乳酸蓄積，導(dǎo)致瘤胃 pH 降低，最終發(fā)生亞急性瘤胃酸中毒。
本試驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，肉牛瘤胃 pH 降低時(shí)，瘤胃中的反芻月形單胞菌數(shù)量顯著減少，但埃氏巨型球菌的數(shù)量顯著增加，乳酸桿菌數(shù)量顯著增加，瘤胃中的乙酸濃度顯著減少，丙酸、丁酸濃度變化不明顯，乳酸濃度顯著增加，在瘤胃內(nèi)蓄積，最終引發(fā)亞急性瘤胃酸中毒。
