周丹 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
所謂活載體疫苗是指用基因工程的方法改造某些細(xì)菌和病毒，使之失去致病性并且具有充當(dāng)活載體的功能，即將致病微生物的目的基因及啟動(dòng)子調(diào)控序列插入整合到充當(dāng)活載體的基因組中，然后將其接種到動(dòng)物體內(nèi)，異源病毒目的基因作為載體基因組的一部分，可隨著活載體的繁殖而不停的表達(dá)，從而刺激動(dòng)物機(jī)體產(chǎn)生針對(duì)活載體及異源性病毒的特異性免疫反應(yīng)，達(dá)到“一針多防”的目的，是畜牧行業(yè)常用的免疫手段。它避免了PRRS滅活疫苗免疫應(yīng)答弱、免疫空白期長(zhǎng)，具有抗體依賴性增強(qiáng)作用等缺點(diǎn);與弱毒疫苗相似，活載體疫苗可同時(shí)啟動(dòng)機(jī)體的細(xì)胞免疫和體液免疫，能較早誘導(dǎo)強(qiáng)而持久的免疫發(fā)應(yīng)，而其安全性與傳統(tǒng)常規(guī)弱毒苗相比大為提高，還可以構(gòu)建多價(jià)疫苗。
目前運(yùn)用比較多的載體微生物主要有:傳染性胃腸炎病毒、腺病毒、痘病毒、疤疹病毒、大腸桿菌、沙門氏菌等。Afonso等傳染性胃腸炎活病毒(Tra- nsmissiblegastroenteritisvirus，TGEV)為載體制備首例PRRSv活病毒載體疫苗，將 PRRSVORFS基因片段插入TGEV輔助表達(dá)系統(tǒng)，構(gòu)建表達(dá)GPS的重組TGEV，并免疫7d齡仔豬三次，采集血樣，通過 ELIsA可檢測(cè)到很高的GPS特異性抗體，但無中和抗體檢測(cè)和免疫保護(hù)試驗(yàn)的報(bào)道。
隨后，Gagnon人腺病毒5型(bAdVS)為載體，表達(dá) RRSVGPS蛋白，并免疫一月齡仔豬，于免疫后4周血樣中未檢測(cè)到中和抗體，再加強(qiáng)免疫，加強(qiáng)免疫后4周血樣中也未檢測(cè)到中和抗體。我國(guó)方六榮等以PRv基因缺失疫苗為活病毒載體表達(dá) PRRsvORFS基因也得到相同的結(jié)果。目前大多數(shù)研究者認(rèn)為這與 PRRSVGPS的抗原表位有關(guān)。GPS上存在主要中和表位B，但在中和表位上端有一個(gè)類似于人免疫缺陷病毒l型的覆蓋表位A，A表位存在覆蓋效應(yīng)，導(dǎo)致中和表位B無法充分暴露，從而難以激發(fā)產(chǎn)生較早、較強(qiáng)的中和抗體。這也是PRRSV全病毒疫苗難以激發(fā)早期中和抗體，免疫原性較差的原因。這種覆蓋效應(yīng)可通過在兩者間插入輔助序列的方式，使其被消除，充分展示中和表位B，經(jīng)過這種方法修飾的E蛋白具有更好的免疫原性，能夠誘發(fā)產(chǎn)生較早和較高的中和抗體，我國(guó)江云波等借助此法在兩表位間插入通用型T輔助細(xì)胞表位(隊(duì)DRE)，證實(shí)這種經(jīng)修飾的基因編碼的E蛋白具有更好的免疫原性，能夠誘發(fā)更早更強(qiáng)的免疫應(yīng)答，為研制高效的PRRS基因工程疫苗提供一條可行的思路。
Balasuriya等在研究PRRsv同屬，并在基因組結(jié)構(gòu)和功能均極相似的馬動(dòng)脈炎病毒(EAV)的活病毒載體疫苗時(shí)發(fā)現(xiàn)，共表達(dá)ORFS與ORF6的重組病毒疫苗能誘發(fā)很強(qiáng)的體液免疫與細(xì)胞免疫反應(yīng)，并能抵抗強(qiáng)毒攻擊。這為發(fā)展更高效的PRRS基因工程疫苗又提供了一個(gè)可行方案，很有希望成為PRRSV新型候選疫苗。Jiang等構(gòu)建了表達(dá)PRRsV修飾的GPS和M融合蛋白的重組偽狂犬病病毒rPRV-GP5m一M，試驗(yàn)結(jié)果表明，重組疫苗免疫豬后能產(chǎn)生高水平的淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)和PRRsv特異性中和抗體，并且能抵抗強(qiáng)毒攻擊。鄭其升等構(gòu)建了共表達(dá) PRRSVGP4、GPS與M蛋白的復(fù)制缺陷型重組痘苗病毒rMVAZGPS/M/GP4。重組疫苗免疫豬后能同時(shí)激發(fā)很強(qiáng)的體液免疫與細(xì)胞免疫 ;shenGuoshun等構(gòu)建了能表達(dá) PRRSVORFS一ORF3和IL一18一ORFS一ORF3重組雞痘病毒活載體，免疫1月齡仔豬后進(jìn)行攻毒，該重組病毒能有效刺激豬外周血中T淋巴細(xì)胞的增殖和Y一干擾素的產(chǎn)生，并且EUSA檢測(cè)和病毒中和試驗(yàn)都可以檢測(cè)到針對(duì)PRRSV的特異性抗體。該重組疫苗對(duì)PRRSV有一定的免疫保護(hù)作用。
基于上述研究成果，以PRRSV的兩個(gè)最主要的免疫保護(hù)原性基因ORFS以及ORF6為靶基因載入活病毒載體基因組，可望獲得一種可同時(shí)有效預(yù)防載體病毒及PRRS的二價(jià)基因工程疫苗。
