高慶 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
經(jīng)多次對(duì)血清Pcv-2特異性抗體進(jìn)行檢測(cè)，爾后選擇出PCV-2陰性豬群，再經(jīng)以PCV-2攻擊來(lái)建立斷奶仔豬免疫抑制模型。豬血清中Pcv-2特異性抗體是高度特異性結(jié)合Pcv- 2oRFZ基因編碼抗原的IgG抗體。仔豬在接種Pcv-2后15-21d血清可檢測(cè)出特異性抗體滴度呈陽(yáng)性。本試驗(yàn)仔豬斷奶后第7d經(jīng)由口鼻用PCV-2毒液進(jìn)行攻毒感染后，在第35d檢測(cè)出其血清中PCV-2特異性抗體的陽(yáng)性率為100%;而未進(jìn)行病毒攻擊的3個(gè)處理組，其仔豬血清PCV-2特異性抗體的陽(yáng)性率為0%;該結(jié)果表明，本試驗(yàn)在試豬上的PCV-2攻毒應(yīng)該是有效的。
PCV-2是PMWS的主要病原，仔豬患病則以生長(zhǎng)遲緩、進(jìn)行性消瘦和多系統(tǒng)病理性損傷為主要特征。本試驗(yàn)Pcv-2攻毒后，攻毒組的仔豬隨即出現(xiàn)了厭食，被毛粗亂，皮膚蒼白和腹瀉加劇等臨床癥狀。試驗(yàn)結(jié)果顯示，與未攻毒的3個(gè)處理組相比，PCV-2攻毒有提高8-Zld腹瀉指數(shù)的趨勢(shì)，顯著降低了仔豬8-21d和22-35d的ADG，極顯著地降低了仔豬 2ld、28d和35d的平均體重，而8-35d的采食量和飼料效率也顯著下降。這些結(jié)果與Okuda等、opriessing等以及陳宏的試驗(yàn)結(jié)果-致。結(jié)果表明，Pcv-2攻擊造成了被攻毒仔豬的生產(chǎn)性能的顯著下降，初步佐證了本試驗(yàn)PCV-2攻毒的有效性。Pcv-2感染仔豬后主要侵襲機(jī)體淋巴組織和肺臟。
因?yàn)楸籔cv-2攻毒仔豬的脾臟和胸腺可能會(huì)腫大，所以本試驗(yàn)中PCV-2攻毒對(duì)于免疫器官指數(shù)的影響并不顯著。但組織切片病理觀察判斷結(jié)果表明，PCV-2攻毒加劇了21d和35d仔豬胸腺、脾臟、腹股溝淋巴結(jié)和肺部組織的損傷，主要表現(xiàn)為實(shí)質(zhì)性器官充血和出血增加，中性、酸性粒細(xì)胞和吞噬細(xì)胞浸潤(rùn)，淋巴細(xì)胞減少，細(xì)胞稠亡后殘留的胞核碎片增加，以及肺臟組織實(shí)變區(qū)域較多和肺泡數(shù)量明顯減少。這些病理變化結(jié)果和前人的研究-致，表明本試驗(yàn)Pcv-2攻毒己經(jīng)對(duì)試豬造成了淋巴器官和肺臟的嚴(yán)重炎癥，并己經(jīng)-定程度地顯示出組織免疫細(xì)胞減少這-主要的免疫抑制特性。檢測(cè)病毒的核酸或抗原或抗體，臨床癥狀觀察和組織顯微病變判斷是目前診斷仔豬Pcv-2感染致病的主要手段，而且三者不可或缺。因此，上述組織病理辨析結(jié)果結(jié)合血清中PCV-2特異抗體檢測(cè)結(jié)果和臨床癥狀結(jié)果，可以確定本試驗(yàn)有效地實(shí)施了對(duì)斷奶仔豬的PCv-2攻擊。
獸醫(yī)的研究表明，PCV-2會(huì)損傷感染仔豬的免疫系統(tǒng)，使淋巴細(xì)胞不能有效地激活和增殖，外周血液中B細(xì)胞和T細(xì)胞減少，并可能引起組織IL-4、IL-10、IFN-a、MCP-1等細(xì)胞因子的水平發(fā)生變化。而本試驗(yàn)PCV-2攻擊并未達(dá)顯著影響仔豬骨髓細(xì)胞增殖和凋亡，外周淋巴細(xì)胞凋亡，外周淋巴細(xì)胞亞群以及血清細(xì)胞因子水平。
可能原因在于，本試驗(yàn)中各組仔豬的腹瀉率都較高，由腹瀉所導(dǎo)致的炎癥和淋巴組織病變會(huì)引起細(xì)胞免疫指標(biāo)和血清細(xì)胞因子水平呈現(xiàn)出復(fù)雜的變化;而因強(qiáng)烈的斷奶應(yīng)激，各組仔豬的免疫系統(tǒng)(組織)遭受了不同程度的損傷，機(jī)體可能皆處于程度不-的免疫抑制狀態(tài)。因此，PCV-2的攻擊盡管加劇了仔豬免疫抑制的程度，但和未攻毒組相比較，在本試驗(yàn)所檢測(cè)的免疫細(xì)胞和血清細(xì)胞因子水平等指標(biāo)上的差異未達(dá)顯著。-般而言，抗原或毒素刺激T細(xì)胞后，細(xì)胞因子分泌增加，巨噬細(xì)胞等被活化，其誘生型-氧化氮合酶 (iNOs)表達(dá)增加，NO產(chǎn)量會(huì)激增。No在機(jī)體效應(yīng)部位可發(fā)揮增強(qiáng)巨噬細(xì)胞和NK細(xì)胞細(xì)胞毒性等作用。而本試驗(yàn)結(jié)果顯示，PCV-2攻擊顯著降低了35d仔豬血清NO的含量。PCV-2是-種嗜單核-巨噬細(xì)胞性的病毒，感染PCV-2的巨噬細(xì)胞免疫功能受損。因此這-試驗(yàn)結(jié)果暗示，Pcv-2攻擊后在仔豬體內(nèi)大量復(fù)制，可能己經(jīng)損害或抑制了體內(nèi)巨噬細(xì)胞發(fā)揮免疫功能。這和周雙海的研究結(jié)果一致。
在體液免疫應(yīng)答中，IgG由脾臟和淋巴結(jié)的漿細(xì)胞合成，是體液中最主要和較穩(wěn)定的免疫球蛋白，約占血清免疫球蛋白總量的75-80%。IgG在機(jī)體防御機(jī)制中起中和外毒素和病毒，激活補(bǔ)體，促進(jìn)吞噬，以及參與抗體依賴細(xì)胞介導(dǎo)的細(xì)胞毒作用等重要作用。高親和力的IgG是二次體液免疫應(yīng)答的標(biāo)準(zhǔn)。
仔豬斷奶后IgG水平會(huì)因母源抗體的降低而下降，然后又隨仔豬免疫系統(tǒng)的發(fā)育完善而逐步上升。本試驗(yàn)結(jié)果顯示，Pcv-2攻擊顯著降低了仔豬第Zld的血清IgG含量，又顯著提高了仔豬第35d的血清IgG含量。這和陳宏的研究發(fā)現(xiàn)基本-致:Pcv-2攻擊會(huì)抑制攻毒后7-14d血清IgG水平和推延血清IgG峰值出現(xiàn)。而PCV-2攻毒提高35d血清IgG，這與第35d的PCV-2特異性IgG抗體100%呈陽(yáng)性的結(jié)果完全吻合，因此可能原因在于豬體內(nèi)的病毒復(fù)制及其生成的特異性抗原增加刺激了免疫系統(tǒng)。血清IgG水平受PcV-2攻擊的顯著影響，并出現(xiàn)較大幅度的波動(dòng)，這-結(jié)果再次佐證了本試驗(yàn)所實(shí)施的PCV-2攻毒有效，且證實(shí)PCV-2攻毒加劇了仔豬的免疫抑制。
實(shí)際上，正如本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)PCv-2攻擊顯著降低了仔豬第Zld的血清IgG含量-樣，PCV-2感染造成的免疫抑制會(huì)使仔豬處于極其危險(xiǎn)狀態(tài)。例如:在豬瘟疫苗接種后不能產(chǎn)生有效的抗體保護(hù)，可使豬瘟等本已得到有效控制的疾病重新出現(xiàn)零星散發(fā)狀況。而對(duì)豬瘟抗體檢測(cè)的結(jié)果表明，本試驗(yàn)所有試豬自始至終都幸運(yùn)地處于抗體100%有效的保護(hù)之下。
綜上所述，有效實(shí)施PCV-2攻毒，可以降低了仔豬的生產(chǎn)性能，并加劇了仔豬的免疫抑制，與未攻毒組有較顯著的差異。因此，以PCV-2攻毒所建立的模型基本成功，可以應(yīng)用于研究評(píng)價(jià)功能性養(yǎng)分(如FA)對(duì)仔豬免疫功能的影響，也可用于鑒定養(yǎng)分能否緩解仔豬免疫抑制。
