劉建華 南昌大學
樣品中糞臭素的提取方法有液一液萃取、液一固萃取和超臨界萃取等。李家勝等獸醫(yī)提取脂肪中的糞臭素采用甲醇勻漿過濾再經(jīng)C18柱除去脂肪，肌肉中的糞臭素經(jīng)甲醇勻漿過濾提取，而血清樣品中的糞臭素采用乙醚提取和乙睛一水溶液兩步提取。采用超臨界二氧化碳在40℃下萃取20分鐘可提取豬背膘中65%左右的糞臭素。鄭君杰等將豬背膘中的脂肪熱融化后采用正己烷去除脂肪后用乙睛一水溶液提取糞臭素。也有將正己烷和異丙醇混合溶劑與豬背部脂肪勻漿后過濾，濾液直接進行HPLc分析。還有將背部脂肪和甲醇勻漿后過濾提取糞臭素，濾液經(jīng)超聲處理并離心后取上清進行分析。
MRius等將背部脂肪樣品和氯仿一甲醇(2:1，V/V)勻漿后室溫放置過夜，提取液經(jīng)無水硫酸鈉過濾脫水后進一步用氯化鈉飽和水溶液脫水分離含糞臭素的有機相后采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀除去有機溶劑，殘留物用正己烷一異丙醇溶解后進行HPLc分析。
Kverheyden等將背部脂肪樣品和甲醇勻漿后，在液氮中冷凍后離心出去懸浮物，將上層清液再次冷凍并過濾以進一步出去懸浮物后進行液相色譜一質(zhì)譜分析。M.Dehnhard等將背部脂肪與正己烷勻漿后用乙睛一水(75:25，V/V)進行提取四。M.Dehnhard等用甲醇提取糞臭素并經(jīng) AmberlitexAD一8柱純化后進行HPLC分析。采用丙酮汀ris緩沖液提取背部脂肪中的糞臭素。 MPorte:為從豬背部脂肪中用提取于氣相色譜分析的糞臭素，首先用甲醇進行粗提，并后續(xù)采用冷凍離心和柱純化等手段去除殘留脂肪卿。
胡彩虹、夏枚生等分析發(fā)酵液中糞臭素的含量，將發(fā)酵液和2倍體積的甲醇混合后經(jīng)離心分離后取上清直接進行HPLc分析。李彩燕等在微生物培養(yǎng)液中按照1:2(v瓜)加入甲醇渦旋混勻后冷凍20min加速沉淀，經(jīng)離心后取上清測定糞臭素的含量網(wǎng)。顧媛采用甲醇提取豬背部脂肪中的糞臭素后經(jīng)C18柱除去脂肪后用于HPI尤分析，對于肌肉樣品用甲醇提取經(jīng)離心和過濾后用于HP硯分析。代敏等為測定保鮮乳中糞臭素作為風味物質(zhì)時比較了靜態(tài)頂空法、固相微萃取和吹掃捕集法后確定采用吹掃捕集法提取揮發(fā)性風味物質(zhì)(含糞臭素)進行Gc一Ms分析。
劉旭輝等對糞便加鋸末的微生物固體發(fā)酵物用甲醇提取其中的糞臭素后進行HPLC分析。李平等分析培養(yǎng)液中糞臭素及其代謝產(chǎn)物時，發(fā)酵液離心后直接將上清液用于HPLC分析，培養(yǎng)液經(jīng)二氯甲烷提取兩次后進行氣相色譜一質(zhì)譜分析。樣品中糞臭素的提取方法多基于糞臭素具強的親脂性而建立，采用有機溶劑提取糞臭素，對于含脂肪較多的樣本可后續(xù)采用柱純化或者冷凍離心的方法進一步除去脂肪，對于含脂肪較少的樣本提取后可以直接測定。
在樣品處理方法選擇時通常需要考慮以下三方面的因素:(1)樣品本身的特點。如脂肪含量、糞臭素含量、其他小分子有機物的存在。(2)分析方法的需求。糞臭素常用的分析方法是采用HPLC結(jié)合紫外或者熒光檢測器分析。紫外檢測的靈敏度稍低，低含量干擾組分的影響不明顯，熒光檢測靈敏度高，樣品溶液純度影響較大。另外如樣品溶液中干擾組分太多對于HPI刀分析時流動相和洗脫方式的選擇也會帶來影響。(3)有機溶劑的選擇。單一溶劑或者混合溶劑都需要考慮溶劑的極性既滿足將樣品中的糞臭素提取完全，同時要減少其他極性或者性質(zhì)相近物質(zhì)的帶入，考慮提取完成后有機溶解的揮發(fā)去除等問題。并且還要求提取方法有好的回收率和重復性。
