李鳳 西南大學
糞臭素的檢測有比色法、正相和反相高效液相色譜法(HPLc)、氣相色譜法以及Lc一Ms等多種方法。比色法基于糞臭素與二甲胺硼烷在室溫下混合后生成的有色化合物在580nm有最大吸收，可進行比色分析?？蓪⒑S臭素的提取液與1.5倍體積的1%二甲胺硼烷乙醇(75%)硫酸溶液混合，在室溫下顯色3min后測定ssonm下的吸光度值。采用Hypersil砂52氨丙基鍵合硅膠柱以正己烷:異丙醇(92:8)作為流動相對含糞臭素的提取液進行分析，熒光檢測的激發(fā)波長為280nm，發(fā)射波長為360nm。檢測的線性范圍為0.05一1卜吮和0.05一0.4卜吮背部脂肪時，相關(guān)系數(shù)分別為0.9916和0.99。
M.Dehnhard等采用反相色譜柱以冰醋酸一異丙醇(70:30，V戊)為流動相進行HpLc分析，檢出限達到4。g/g脂肪。 JensHansen一Moller等用BondElutcls反相柱完成HPLc分析，糞臭素的檢測限達到1和g/kg背部脂肪128]，并且他們還采用 HypersilODS反相柱測定了豬背部脂肪中糞臭素的含量并和比色法得到的結(jié)果進行了比較。
采用如下的流動相:(A)四氫吠喃一 25mMpH6.。磷酸鹽緩沖液一冰醋酸(31:67.6:1.4，v理)，(B)四氫吠喃一乙睛一 25mMpH6.0磷酸鹽緩沖液一冰醋酸(34:23.8:41.4:0.8，v/V)，(C)四氫吠喃一水(90:10，V/V)進行梯度洗脫，熒光檢測器激發(fā)波長為285nm，發(fā)射波氏340nm。檢測限可達30n吮背部脂肪，并同時采用比色法測定。384個樣品測定結(jié)果比較表明HPLC和比色的結(jié)果良好相關(guān)。上述結(jié)果與他們早些時間的研究結(jié)果一致。而Hawe等的研究結(jié)果顯示比色法和GC法的結(jié)果一致性較差，其研究樣本中糞臭素的平均含量較低接近比色法的檢測限可能是導致這個結(jié)果的原因。
MPorte:使用極性毛細管柱和火焰離子檢測器對糞臭素進行了氣相色譜分析，并可同時檢測叫噪。Kverheyden建立了采用Lc一Ms同時分析糞臭素、叫睬和雄烯酮的方法。液相色譜采用C18柱，以甲醇(A)一1%醋酸(B)為流動相進行梯度洗脫 (50%A:50%Bomin， 100%A7min， 100%A17min)。
質(zhì)譜分析采用帶大氣壓化學電離(APCI)接口的LTQ線性離子阱質(zhì)譜儀。分析條件為汽化溫度400℃，鞘氣40，輔助氣 5Aib，毛細管溫度275℃，毛細管電壓2V，Tubelens補償電壓60v，采用全掃描和子離子掃描分析模式。方法線性范圍為50一1600陀瓜g背部脂肪，線性相關(guān)系數(shù)為0.997。結(jié)果表明方法的回收率，準確性和檢出限都與樣品的前處理有很大關(guān)系，樣品基質(zhì)對糞臭素的分析影響比較小陣。
夏枚生等采用c18柱以乙睛一水(60:40，v/V)作流動相，熒光檢測器激發(fā)波長270nm，發(fā)射波長350nm，對發(fā)酵液中的糞臭素含量進行了分析。鄭均杰等采用oDs柱并以乙酸一異丙醇(70:30，V/V)為流動相，流速1.smUmln，熒光檢測器的激發(fā)波長281nm、發(fā)射波長352nm對樣本中的糞臭素進行了測定。結(jié)果顯示標樣在120ng/mL濃度范圍內(nèi)的線性良好。李家勝等采用 EcipsexDBcs柱以乙睛一水(40:60，v阿)為流動相，熒光檢測器激發(fā)波長270nm、發(fā)射波長350lim，分別對皮下脂肪、背最長肌肉和血清中的糞臭素進行了測定。進樣量在0.27一3.32ng范圍內(nèi)的線性相關(guān)性在0.999以上。李彩燕等采用 EciPseXDBCS柱，經(jīng)比較甲醇一水和乙睛一水分別做流動相后，應甲醇一水體系柱壓較高而選擇了乙睛一水作為流動相進行梯度洗脫，熒光檢測器的激發(fā)波長280nm、發(fā)射波長350nm，檢測結(jié)果顯示糞臭素在1.15一73.386的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)系數(shù)達0.9998，檢出限達0.88卜mol幾，定量限達2.95卜mof幾。
梯度洗脫的原因主要是因為同時還檢測L一色氨酸、叫垛一3-乙酸。董利文等采用cBPI一w25一100型大口徑毛細管色譜柱以正十二烷做內(nèi)標，在初溫85℃，保持lmin，以15℃/min升溫至230℃，保持smin，樣品與溶劑、雜質(zhì)峰、有較理想的分離效果，糞臭素的濃度在5一25mL濃度范圍的線性相關(guān)系數(shù)達0.9997，加標回收率在99.73一100.04%間，測定簡單快速。顧媛等使用c18柱在進行乙睛一水和乙酸溶液一異丙醇兩種流動相后采用乙睛一水(40:60，V阿)為流動相分析糞臭素的含量，在3一120n歲mL濃度范圍內(nèi)峰面積和濃度的線性相關(guān)系數(shù)達0.9999，進樣時，糞臭素的檢出限為0.08，定量限為0.26n吮，方法的精密度和可信度較高。代敏等采用Gc一Ms分析了保鮮乳中糞臭素的含量。MS采用EI離子源，全掃描方式掃描，離子源溫度200℃，接口溫度250℃。定量方法采用標準物質(zhì)峰面積與內(nèi)標物質(zhì)峰面積之比為縱坐標，濃度為橫坐標做標準曲線。糞臭素在0.05一。
.4卜叭的濃度范圍內(nèi)線性相關(guān)良好哪]。劉旭輝以水一甲醇(40:60，V戊)為流動相對糞便固體發(fā)酵前后糞臭素的含量進行了HPLc分析。 MTuomola等采用HPLc分析了豬脂肪組織、血清和涎腺中糞臭素的含量脾。俞小輝等采用 HPLc分析了仔豬糞便發(fā)酵仔豬日糧后產(chǎn)生的糞臭素含量I釗。李平對微生物發(fā)酵液離心后進行HPLc分析，采用甲醇一水作為流動相進行梯度洗脫，紫外檢測波長225nm因。從目前的研究情況看，熒光檢測具有好的靈敏度、特異性和寬的線性范圍，峰面積和濃度的線性相關(guān)性良好，已經(jīng)成為檢測糞臭素含量的成熟方法。在糞臭素含量較高的時候采用紫外檢測也具有較大的線性范圍和良好的相關(guān)性。
目前實驗室檢測糞臭素的方法已經(jīng)具有一定的靈敏度、專一性和準確性，線性范圍大，線性相關(guān)性良好。糞臭素本身能發(fā)熒光，僅分析糞臭素可采用熒光檢測器既方便又具有高的靈敏度。并且糞臭素也可采用紫外檢測器檢測。但是當含量比較低的時候為了提高檢測的靈敏度通常采用熒光檢測。糞臭素和其他組分的分離采用 HPLC通過調(diào)整流動相組成和洗脫梯度等也比較容易實現(xiàn)。樣品檢測的耗時主要是樣品的前處理，并且樣品前處理的好壞也直接影響后續(xù)的分析方法的選擇應用和分析結(jié)果。因此樣品的前處理是糞臭素分析的重要研究內(nèi)容。另外在實踐應用的分析中通常還需要同時檢測像雄烯酮及其他的對擅味有影響的物質(zhì)，這樣樣品的前處理和檢測方法的選擇就更加的復雜一些。因此在選擇糞臭素的檢測方法的時候必須考慮樣本的基質(zhì)特點、糞臭素的含量水平以及是否要同時檢測其他對擅味可能有貢獻的其他組分，從而選擇適宜的樣品處理方法和分離純化系統(tǒng)以及適當?shù)臋z測器和檢測的波長。
以上的檢測方法都主要適用于實驗室的研究分析，分析全過程耗時較多，不能滿足畜牧屠宰線上的快速檢測的需要，品種選育的高通量篩選也迫切需要快速的檢測方法。因此建立糞臭素的快速、簡便和可靠的檢測方法是許多實驗室一直努力的目標。
