馬豐英 華中農(nóng)業(yè)大學
1酶聯(lián)免疫吸附試驗(ELISA)
BereiterM等獸醫(yī)發(fā)現(xiàn)ELISA法可在豬人工感染3周后檢測到抗體。Fekl等建立了不需完全純化抗原的單克隆抗體阻斷ELISA方法。隨后,Potier等利用豬肺炎支原體特有的膜蛋白作抗原進行單克隆抗體阻斷ELISA,避免與絮狀支原體和豬鼻支原體的交叉反應。OkdaaM等利用P46的單克隆抗體及其原核表達蛋白建立了雙夾心ELIsA方法。
2補體結合試驗(CFT)
L10yd等認為補體結合試驗出現(xiàn)假陰性是因循環(huán)抗原的影響,而假陽性則是由于沒產(chǎn)生或發(fā)現(xiàn)病變或感染其他支原體導致交叉反應,但該法無法確定4一9周齡豬的感染狀況。BereiteM等發(fā)現(xiàn)eFT可檢出感染2周的豬肺炎支原體抗體。雖然CFT陽性率與豬肺部病變相關性好,但存在較高假陽和假陰性。
3免疫酶試驗(IEA)
Vibeke等用IEA檢測豬肺炎支原體時,光學顯微鏡下可看到結構清晰的病原,樣品能長期保存。但該法在人工感染35天后才檢到抗體。
4免疫熒光試驗(IF)
D.Kwon等用改良的直接熒光抗體技術可檢出人工感染2一12周后豬的細支氣管及細支氣管上皮中的豬肺炎支原體。間接免疫熒光技術用于冰凍切片檢測早已經(jīng)在丹麥SPF豬群中應用,但僅限于豬肺炎支原體大量存在時。
5間接血凝試驗(IHA)
Dowdie等用IHA檢測豬肺炎支原體抗體,但感染豬血清能使綿羊紅細胞自然溶血。Lam等用豬紅細胞替代綿羊紅細胞,效價雖低但不易溶血。國內(nèi)廣泛使用中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所的檢測豬肺炎支原體抗體的間接血凝試劑盒。 FreemanMJ等通過ELISA、CFT及剖檢來評價IHA時發(fā)現(xiàn),該法檢測滴度低、檢測結果與感染相關性低。
6放射免疫酶試驗(RIDEA)
BereiterM等得出DEA在感染5周后才檢測到抗體的結論。
7表面細胞質(zhì)基因組共振試驗(SRP)
KimTJ等用p97粘附因子中約 30KD的蛋白為抗原,建立表面細胞質(zhì)基因組共振試驗用于檢測豬肺炎支原體抗體滴度,并與傳統(tǒng)的ELISA方法檢測結果比較,具有較高特異險和敏感性
