徐國華 南京農(nóng)業(yè)大學
目前，關(guān)于豬胸膜肺炎疫苗的畜牧研究有很多，也有一些商品化的進入市場，但是暫時還沒有能提供完全保護的疫苗。APP的疫苗包括滅活苗、弱毒苗、亞單位疫苗、ghost疫苗等，這些疫苗各有優(yōu)缺點，其中以亞單位疫苗的應(yīng)用前景最為突出。以下對APP的亞單位疫苗的研究進展展開綜述。
1溶血毒素APx(haemolysins)
Apx毒素是APP的主要毒力因子，具有很強的免疫原性，因此它也是APP重要的保護性抗原成分。關(guān)于APx毒素的研究非常多。cruijsen等研究表明APx毒素的中和抗體能夠保護中性粒細胞，以防細菌將之殺死，隨之中性粒細胞就清除侵入的細菌。Hagalss用親和程析純化的Apx工及APxn免疫試驗豬后，用同血清型菌株攻毒后，免疫組不出現(xiàn)臨床癥狀，也不出現(xiàn)死亡，能產(chǎn)生較好的免疫保護力。而且使用APx毒素作為疫苗，跟全菌苗相比有個最大的優(yōu)點是它能產(chǎn)生交叉免疫保護。這是因為很多不同血清型的APP都可以產(chǎn)生同樣的Apx。又有研究顯示APxIN端表達片斷能夠在小鼠體內(nèi)誘發(fā)較好的免疫保護反應(yīng)，可以抵抗APP幾種血清型的攻擊。、乞n[40]等研究發(fā)現(xiàn)，將其它的保護性抗原成份與APx混合后制成的亞單位疫苗可能具有更好的保護效果。眾多研究表明Apx毒素與其它毒力因子成份聯(lián)合免疫保護試驗均證實Apx毒素是疫苗的最主要成份，因為只有具備這些毒素成份才能使動物抵抗APP的攻擊，從而達到保護效果。迄今為止，幾乎所有的被稱為商品化第二代APP的亞單位疫苗均含有Apx毒素。
Haesebrouk研究發(fā)現(xiàn)用能分泌Apx工、APxH和APxlll+APxlv的不同血清型的APP菌株免疫動物，再用分泌Apxll十APxm的APP攻毒，所有的免疫組都不出現(xiàn)臨床癥狀，除了APx毒素之外，還存在著其他抗原成分能誘導機體產(chǎn)生交叉免疫保護。
2 轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白
在不同的APP血清型中發(fā)現(xiàn)了三種轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白(TbPB)，它們的分子量分別是60、62和65kDa。一般情況下，涉及鐵吸收的蛋白都是潛在的亞單位疫苗的候選，應(yīng)該對其免疫保護力進行研究。由于轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白TbP是胸膜肺炎放線桿菌的定殖因子和毒力因子，具有免疫原性，可作為疫苗的有效成分。用免疫印記證明了在E.coli中表達的重組TbpA、TbPB蛋白具有免疫原性，能作為亞單位疫苗進行研究。國外研究一般采用將Tbp蛋白和其他保護性抗原成分如Apx毒素等混合，研究其免疫原性及保護力。Rossi一camPos等用轉(zhuǎn)鐵結(jié)合蛋白TbPB及Apx毒素單獨或共同免疫免疫豬后，所有試驗組均能產(chǎn)生比自然感染更強的體液免疫;攻毒后試驗動物感染及死亡率比對照組明顯降低;免疫兩種疫苗的試驗動物比單獨免疫一種疫苗及對照組康復快。也證明含有TbPS及Apx毒素的疫苗比只含有APx毒素的試驗組能產(chǎn)生更好的免疫保護力。Goethe等在鐵限制條件下培養(yǎng)APPZ型和9型菌，使鐵調(diào)節(jié)的外膜脂蛋白表達，用0.05%去氧膽酸鈉裂解并富集外膜脂蛋白，將含有omlA、TbpB蛋白及APx毒素等多種抗原成份的培養(yǎng)物免疫豬后，用ELIsA法測定抗體效價，發(fā)現(xiàn)疫苗能夠誘導機體產(chǎn)生針對CFS的高滴度抗體;用APPZ型菌株支氣管內(nèi)攻毒，試驗組只發(fā)生輕微的臨床癥狀，肺的損傷也不明顯，從輕微病變的肺組織中不能分離出APP，說明疫苗能產(chǎn)生堅強的保護力。轉(zhuǎn)鐵合成蛋白在APP亞單位疫苗的研究中具有重要的意義，可以提供較為理想的免疫保護力，但TbPB疫苗也具有非常明顯的缺陷，如不能產(chǎn)生交叉免疫保護力，這也大大的限制了其使用的范圍。
3外膜蛋白 (outerMembraneProteins，OMp)
外膜蛋白OMP是胸膜肺炎放線桿菌的一個重要毒力因子，也是重要的保護性抗原，為所有的APP所共有，但是每種APP血清型的OMP結(jié)構(gòu)上都存在差異。它包括四種:T幾A、42kDa麥芽糖誘導蛋白、 14kDa膚聚糖相關(guān)脂蛋白PalA和50kDa的脂蛋白om1A。針對oMP的抗體具有調(diào)理活性。研究發(fā)現(xiàn)，APP的四種外膜蛋白均能夠被APP的豬康復血清所識別。但是OMP的免疫保護力總是不能達到滿意的程度。研究發(fā)現(xiàn)，外膜蛋白(OMP)免疫豬后，豬只能抵抗同源菌株的攻擊，但仍然有死亡的情況，而且病理解剖發(fā)現(xiàn)存在肺損傷現(xiàn)象，這說明盡管OMP是APP的一種重要保護性抗原，但不足以提供完全的免疫保護。
研究表明，并非所有的外膜蛋白都適合應(yīng)用于疫苗的研究。編碼PalA的基因序列分析表明，該蛋白的序列與大腸桿菌的PAL脂蛋白、流感嗜血桿菌的P6外膜蛋白具有高度的同源性，且與其他的一些革蘭氏陰性菌也有一定的相關(guān)性。這一基因在所有血清型的APP中均存在且具有高度保守性。然而，有些OMP可能干擾其他保護性抗原的免疫保護作用，Bosch[，3]等于2003研究發(fā)現(xiàn)，以PalA和AP、 I+APx11及PalA十APxl+APxlll分三組免疫豬并進行免疫保護試驗，結(jié)果顯示PalA組和PalA+APx工+Apxln組對APPI型菌攻擊幾乎沒有保護力，而Apx工+APxn組則可以提供100%的保護。作者認為是由于PalA抗體中和了 APx工和(或)APxlll的抗體所致。因此建議PalA不應(yīng)作為APP的亞單位疫苗候選成份。目前更多的研究局限于用康復血清對OMP進行免疫印跡分析，以評價具有免疫保護潛力的OMP的潛在免疫保護力。
