余騰 華中農(nóng)業(yè)大學
獸醫(yī)在規(guī)模化豬場中，采集種公豬、經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬、哺乳仔豬、保育仔豬、育肥豬等不同階段的鼻拭子樣品。
1鼻拭子樣品采集計劃和背景調(diào)查
鼻拭子樣品采集數(shù)量按照每個規(guī)模化豬場中不同階段豬群總數(shù)的1一5%進行采集鼻拭子樣品。哺乳仔豬和保育仔豬的采樣比例約為5%;種公豬采樣比例約為1%;經(jīng)產(chǎn)母豬、后備母豬和育肥豬采樣比例在1一3%之間。
采樣之前調(diào)查采樣豬場的背景:疫苗的免疫種類和時間，豬場是否有萎縮性鼻炎癥狀出現(xiàn)，豬場的生產(chǎn)管理情況等，依據(jù)豬場的基本情況，適時調(diào)整采樣計劃，使采樣方案更能反映出豬萎縮性鼻炎的病原菌產(chǎn)毒素多殺性巴氏桿菌的流行情況。
2鼻拭子樣品的采集和處理
鼻拭子樣品的采集:將要進行采集鼻拭子的豬只的頭部固定(小豬直接用手固定住頭部，4Okg以上的豬則需使用套口器將其頭部固定)，用酒精棉迅速擦去豬鼻盤周圍的污物，取出無菌的醫(yī)用棉簽，插入豬鼻腔中后部，輕輕轉(zhuǎn)動幾次，迅速抽出棉簽拭子，并立即放入滅菌的空EP管中或已經(jīng)裝有500拼LTsB培養(yǎng)基的EP管中，短時間內(nèi)放入4℃條件下冷藏，24h內(nèi)應(yīng)對鼻拭子樣品進行檢測。
鼻拭子樣品的處理:在裝有鼻拭子的EP管中加入500林 LTsB培養(yǎng)基放入37’C搖床中培養(yǎng)6一8h(已經(jīng)放入有培養(yǎng)基的鼻拭子樣品EP管直接放入搖床中)，隨后取出棉簽拭子，將其放入滅菌的空EP管中;鼻拭子樣品按照3.2.1.1中方法制備巢氏PCR模板。
3鼻拭子樣品的檢測
巢式PCR方法進行兩輪PCR擴增，隨后通過電泳驗證是否擴增出目的片段，一記錄檢測結(jié)果。陰、陽性對照成立才能記錄結(jié)果，否則，需要重新進行檢測。
4鼻拭子樣品檢測的結(jié)果統(tǒng)計分析
將檢測結(jié)果進行分場分批統(tǒng)計，計算出鼻拭子總陽性率，各個豬場陽性率，各個豬等數(shù)據(jù)，并進行進一步分析，得出相關(guān)結(jié)論。
