吳志強(qiáng) 西川農(nóng)業(yè)大學(xué)
哺乳動物印跡基因都具有一定的周期性，其周期大致分為三個過程:印跡的建立，印跡的維持和印跡的去除。其中印跡的建立是在配子形成過程中完成的，但在配子形成后，印跡基因的印跡狀態(tài)在后續(xù)的胚胎發(fā)育和個體生長過程中保持不變。因此正常情況下，30d胎兒成纖維細(xì)胞中的甲基化狀態(tài)與新生正常胎豬中的甲基化水平類似。
為了驗證IGFZ/Hj基因在克隆豬肺臟中的異常甲基化和IGFZR基因在克隆豬肺臟和肝臟中的異常甲基化狀態(tài)是否有供體細(xì)胞帶來，我們檢測了與新生克隆豬供體細(xì)胞同批傳代的胎兒成纖維細(xì)胞中的甲基化狀態(tài)。結(jié)果顯示，它們在胎兒成纖維細(xì)胞中的甲基化狀態(tài)與其在正常胎豬各組織中的甲基化差異不顯著(P>0.05)。然而基因DMRZ的甲基化水平極顯著低于其在克隆豬肺組織中的甲基化率(P<0.01);IGFZR基因DMRZ的甲基化水平顯著低于其在克隆豬肝組織中的甲基化率(P<0.05)和極顯著高于其在克隆豬肺組織的甲基化率(p<0.01)。這說明IGF2/H19基因和IGF2R基因在克隆豬中的異常甲基化不是由供體細(xì)胞帶來，而是由于不完全甲基化重編程造成。
雖然印跡基因?qū)w外操作很敏感，但我們實驗用的體外培養(yǎng)細(xì)胞中印跡基因的甲基化水平與正常豬類似，差異不顯著(P>0.05)，可能跟我們所用的細(xì)胞傳代次數(shù)少(第4代)、體外培養(yǎng)時間較短有關(guān)。
