張平平 廣東海洋大學(xué)
MTT 法是畜牧研究人員常用的一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法，常用其描繪細(xì)胞生長曲線。其檢測原理是：活細(xì)胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶在外源性 MTT 作用下，還原為不溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物甲臜，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞則無此功能；二甲基亞砜(DMSO)能溶解細(xì)胞中的甲臜，通過酶聯(lián)免疫檢測儀在 490nm 波長處測定其光吸收值，可間接反映活細(xì)胞數(shù)量。在一定范圍內(nèi)，甲臜結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。該方法靈敏度高、經(jīng)濟(jì)，已廣泛用于一些生物活性因子的活性檢測、大規(guī)模的抗腫瘤藥物篩選、細(xì)胞毒性試驗(yàn)以及腫瘤放射敏感性測定等。
細(xì)胞生長曲線是觀測細(xì)胞在一代生存期內(nèi)的增殖過程的重要指標(biāo)。離體培養(yǎng)的大多數(shù)細(xì)胞生長都遵循基本規(guī)律——呈現(xiàn) S 型的增殖趨勢。離體培養(yǎng)的細(xì)胞在經(jīng)歷貼壁和短暫的生長停滯期后，細(xì)胞開始增殖。與此同時(shí)，細(xì)胞內(nèi)的遺傳信息不斷自我復(fù)制，并進(jìn)行有絲分裂，在一段時(shí)期內(nèi)，細(xì)胞數(shù)量呈指數(shù)增長。離體培養(yǎng)細(xì)胞并不能無限增殖，當(dāng)細(xì)胞增殖到一定程度，細(xì)胞發(fā)生匯合，產(chǎn)生接觸抑制以及密度抑制。豬前脂肪細(xì)胞的離體培養(yǎng)的增殖規(guī)律，也同樣遵循著這個(gè)基本規(guī)律。在本實(shí)驗(yàn)中，從豬頸部皮下脂肪組織分離出的豬前脂肪細(xì)胞在含 10%小牛血清的 DMEM/F12 培養(yǎng)液中體外培養(yǎng)，其生長增殖規(guī)律也呈現(xiàn)類似的 S 型生長曲線。與 Van 等所得結(jié)論是一致，本實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本符合一般細(xì)胞離體培養(yǎng)增殖的規(guī)律。并且，細(xì)胞體現(xiàn)出的群體倍增為4.73 天，這也與一般細(xì)胞離體培養(yǎng)增殖的群體倍增時(shí)間相近。
從仔豬脂肪組織中分離豬前脂肪細(xì)胞并成功進(jìn)行離體培養(yǎng)，采用 MTT 法、油紅O 染色以及 LPL 活性測定對豬前脂肪細(xì)胞形態(tài)、增殖與分化規(guī)律進(jìn)行了初步鑒定，結(jié)果表明：
（1）原代豬前脂肪細(xì)胞增殖呈現(xiàn) S 型增殖規(guī)律，倍增時(shí)間為 4.73 天，培養(yǎng)至第7 天形成細(xì)胞單層并進(jìn)入接觸抑制狀態(tài)。
（2）豬前脂肪細(xì)胞在離體原代培養(yǎng)第 3 天開始充脂，到第 9 天大量充脂過程中，細(xì)胞由梭形逐漸變成圓形，細(xì)胞內(nèi)開始聚集大量小脂滴，隨后小脂滴匯聚成大脂滴，細(xì)胞體積增大，成為成熟的脂肪細(xì)胞。
（3）LPL 活性也隨前脂肪細(xì)胞的增殖、分化呈現(xiàn)出先升高后下降的變化趨勢。
