黃律 中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院
目前博卡病毒屬中已知病毒形態(tài)的只有人博卡病毒，關(guān)于豬博卡病毒的相關(guān)功能蛋白的研究還未見(jiàn)報(bào)道，已知的幾型的豬博卡病毒的ORF都來(lái)源于生物信息軟件的預(yù)測(cè)，各功能蛋白的劃分也來(lái)源于預(yù)測(cè)。Gurda等通過(guò)將HBoV1的VP2片段與桿狀病毒進(jìn)行重組獲得了重組的HBoV1-VP2，并在Sf9細(xì)胞中傳代培養(yǎng)組裝出了HBoV1的病毒樣顆粒（VLPs），電鏡下觀察發(fā)現(xiàn)與其他細(xì)小病毒相似，病毒大小在22-25nm之間，病毒形狀近似圓形或六邊形，病毒顆粒無(wú)囊膜。通過(guò)冷凍電鏡觀察獲得了其三維結(jié)構(gòu)，結(jié)果顯示盡管人博卡病毒VP2基因的序列與其他細(xì)小病毒差別較大但是三維結(jié)構(gòu)極其相似，表面的突起形態(tài)類(lèi)似。
PBoVs基因組為單鏈線性DNA，大小約為5173-5905bp。PBoV1、PBoV2、6V、7V以及PPV4的基因組結(jié)構(gòu)基本一致，都存在3個(gè)開(kāi)放閱讀框（ORF），即5 末端編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NS1（約1911bp），3 端編碼結(jié)構(gòu)蛋白VP1/VP2（約1872bp），以及中間序列編碼非結(jié)構(gòu)蛋白NP（約657bp）。但Cheung等研究發(fā)現(xiàn)PPV4的序列為環(huán)狀結(jié)構(gòu)，長(zhǎng)度約5905bp，三個(gè)開(kāi)放閱讀框的長(zhǎng)度分別為NS（1794bp）NP（612bp）VP（2184bp）。近日Lüsebrink J等通過(guò)研究也發(fā)現(xiàn)HBoVs序列也存在首尾相連的環(huán)狀結(jié)構(gòu)[18]。此外其他細(xì)小病毒列如AAV也曾報(bào)道存在環(huán)狀結(jié)構(gòu)基因組DNA。
HBoVs具有三個(gè)主要蛋白：NS、NP和VP蛋白，關(guān)于HBoVs功能蛋白的研究已經(jīng)有所深入。研究表明，NS1和NS2構(gòu)成博卡病毒的非結(jié)構(gòu)蛋白，它有DNA解旋酶和ATP酶的活性，并進(jìn)行DNA復(fù)制所必需。VP蛋白則主要負(fù)責(zé)博卡病毒顆粒的包裝，其在病毒感染性方面也具有重要的作用，并且具有典型的鈣離子依賴的分泌性PLA2活性，有可能作為靶點(diǎn)開(kāi)發(fā)抗病毒藥物。NP蛋白目前具體的功能未知，畜牧研究人員推測(cè)可能與病毒的復(fù)制相關(guān)。目前關(guān)于豬博卡病毒的相關(guān)功能蛋白的研究還未見(jiàn)報(bào)道，已知的幾型的豬博卡病毒的ORF都來(lái)源于生物信息軟件的預(yù)測(cè)，各功能蛋白的劃分也來(lái)源于預(yù)測(cè)。PPV4相關(guān)功能蛋白的劃分僅見(jiàn)于Cheung等未發(fā)表的論文中，該研究小組將PPV4全長(zhǎng)和PCR2.1載體構(gòu)建全長(zhǎng)克隆轉(zhuǎn)染PK-15細(xì)胞，收集細(xì)胞上清提取總RNA進(jìn)行Northern-blot實(shí)驗(yàn)，研究首次披露了PPV4體外轉(zhuǎn)染后病毒復(fù)制過(guò)程中所產(chǎn)生的亞基因組的序列以及在基因組的位置。結(jié)果顯示NS序列主要編碼病毒復(fù)制酶相關(guān)系列蛋白，存在4個(gè)亞基因組；NP蛋白功能不明確，存在2個(gè)亞基因組；VP蛋白編碼病毒核衣殼蛋白，存在2個(gè)亞基因組。這對(duì)于進(jìn)一步體外準(zhǔn)確的表達(dá)出病毒的功能蛋白十分有益。
在體外細(xì)胞培養(yǎng)方面，不管是人博卡還是豬博卡病毒都遇到了瓶頸，未找到有效的體外培養(yǎng)方式。HBoVs目前主要報(bào)道采用假?gòu)?fù)層人氣道上皮細(xì)胞以及支氣管上皮原代細(xì)胞進(jìn)行病毒體外培養(yǎng)。PBoVs目前還未找到有效的體外細(xì)胞進(jìn)行病毒培養(yǎng)。翟少倫等在對(duì)中國(guó)PBoVs進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，從多種豬組織中檢出PBoVs，表明PBoVs可能感染豬的多種組織，有可能可以制備多種豬原代細(xì)胞嘗試分離病毒。
