劉海濤 山東農(nóng)業(yè)大學(xué)
對于附紅細(xì)胞體的血清學(xué)診斷方法國內(nèi)獸醫(yī)的研究較少，國外研究相對較多。目前報道的主要方法有：
1 間接血凝抑制實驗（IHA）：
Smith 等采取抗凝血并分離附紅細(xì)胞體作為檢測用抗原，從接種附紅細(xì)胞體的康復(fù)豬體內(nèi)獲得抗體作為檢測用抗體，收集 IgM 和 IgG，用雙向瓊擴檢測其抗原抗體特異性后進行 IHA 試驗，結(jié)果接種豬血清效價達到 1: 40 以上，感染有微粒孢子蟲的豬檢測得到陰性結(jié)果。此法在一定程度上能夠檢測出潛在感染病豬。
2 補體結(jié)合實驗（CFT）：
1958 年 Splitter 首先報道用補體結(jié)合試驗診斷豬附紅細(xì)胞體病，病豬在臨床發(fā)病后第一周，患畜血清呈陽性反應(yīng)，但 2-3 周后逐漸轉(zhuǎn)為陰性。該方法對于急性病例效果較好，但慢性病例則為陰性。
3 酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）：
Lang 等建立了將附紅體與紅細(xì)胞分開，制備抗原的方法，用去掉紅細(xì)胞的E.ovis抗原對羊進行ELISA與間接血凝試驗(IHA)的對比，認(rèn)為ELISA比 IHA 敏感性高 8 倍，Hsu 等人用 ELISA 及 CFT 檢查 E. suis 感染豬，ELISA 敏感性明顯高于 CFT, 而且證明 E. suis 抗原與豬的其他病感染的血清無交叉反應(yīng)。因此ELISA 是一種敏感、快速、特異的診斷方法。但此法不適用于小豬及公豬的診斷，也不適用于急性病例診斷。
Frank 等無菌采取患病抗凝豬血，分離抗原，并進行 10 倍遞進稀釋；采用 1-6 周齡 SPF 豬血清，并設(shè)有胸膜肺炎、巴貝斯蟲、放線桿菌感染豬血清做對照，用辣根過氧化物酶標(biāo)記的羊抗豬 IgG 做二抗并；采用鄰苯二胺（OPD）顯色進行 ELISA 實驗。同時進行 IHA 實驗。
兩則結(jié)果進行比較，表明 ELISA 陽性率為 87.7%，而 IHA 檢測陽性率為 80.7%。且與胸膜肺炎、巴貝斯蟲放線桿菌等無交叉反應(yīng)，可用于快速診斷。張守發(fā)等人所建立的Dot- ELISA 不與常見豬病陽性血清發(fā)生交叉反應(yīng)，且穩(wěn)定性高。韓惠瑛等人用物理方法純化豬附紅細(xì)胞體抗原，建立的以辣根過氧化物酶標(biāo)記葡萄球菌 A 蛋白為二抗的酶聯(lián)免疫吸附試驗(PPA-ELISA)檢測方法，也具有很高的敏感性和特異性，重復(fù)性良好。
4 免疫熒光試驗(IFA)：
Ohder 首先用 IFA 診斷該病，Nicholls 等用 IFA 檢查羊的 E.ovis 感染表明該方法敏感、特異。但在 Lang 的報告中認(rèn)為 IFA 的敏感性低于 ELISA。1970 年華松等用 IFA來診斷牛溫氏附紅細(xì)胞體病，抗體在第 4 天出現(xiàn)，隨著感染率上升，抗體水平在第 28天達到高峰。
