徐越 四川農(nóng)業(yè)大學(xué)
真菌的核糖體DNA是由核糖體基因及與之相鄰的間隔區(qū)組成，其基因組序列從5’到3’依次為:外部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) (externaltranscribedspacer，ETS)、 185基因、內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū) 1(internaltranseribedspacer，ITSI)、5.55基因、內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)2(xTsZ)、285基因和基因間隔序列 (intergeniespaeer，IGs)。
真菌核糖體DNA中的 185、 5.85和285的基因組序列在大多數(shù)生物中趨于保守，在生物種間變化小。而核糖體DNA中的ITS區(qū)受外界環(huán)境因素的影響較小，與編碼區(qū)域相比具有進化速度慢的特點，在種內(nèi)不同菌株之間高度保守，而在真菌種間存在極大變化，表現(xiàn)出極大的序列多態(tài)性，可為真菌學(xué)研究提供豐富遺傳信息。
眾多畜牧人的研究表明ITs區(qū)域差異大于l%就可能代表不同的種，但不同屬的情況可能會有所不同。 Gloriascorzetti等人研究表明，c.magnus、F‘magnus和F.floriforme的 265rRNADl/D2區(qū)基因序列是完全相同的，只通過這段基因序列分析無法區(qū)分這三個種，但是在5.85一ITS區(qū)序列存在很大的差異，通過5.85一ITs區(qū)序列分析可以被很好的區(qū)別。汪碧涵等通過比對 rDNADl/DZ和ITs序列繪制的9種紅色酵母的系統(tǒng)發(fā)育樹，發(fā)現(xiàn)ITS區(qū)域的變異性高于Dl/DZ序列，但二者結(jié)論一致，說明利用ITS區(qū)域的序列分類真菌的屬、種以下水平是可行的。彭幫柱等利用ITsl一5.85一ITsZ區(qū)，進行擴增，鑒定了一株用于發(fā)酵柿子酒的微生物，結(jié)果表明該菌株為釀酒酵母 saeeharomyeeseerevisiae。方華，曹任等應(yīng)用真菌ITsrDNA通用引物ITSI和ITS4擴增整個ITS序列(包括ITSI和ITS2)鑒定了從黃酒麥曲中分離出了真菌，經(jīng)測序和序列比對，這5株菌分別為傘枝犁頭霉 (Absidiacorymbifera)、微小毛霉 (Rhizomueorpusillus)、米曲霉 (Aspergillusorgyze)、煙曲霉(Aspergillusfumigatus)、米根霉。
很多學(xué)者還研究了植物中的致病真菌的ITS區(qū)，并將其作為鑒定致病性真菌的有效手段之一。陳懷谷等對7個從江蘇省小麥紋枯病樣本分離到的絲核菌菌株的ITS序列進行分析，得到與這些菌株親緣關(guān)系最近的菌株序列，并明確了這些菌株的分類地位。高永洋，高觀朋等采用真菌核糖體基因轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)域 (ITS)通用引物，PcR擴增3株不同的黃瓜黑星病茵核糖體基因的ITS序列，并對PCR產(chǎn)物進行測序和序列分析，結(jié)果表明，這3株真菌為瓜瘡癡枝抱霉 cladosPoriumcucumerinu。所以，利用真菌的ITS片段，對真菌進行分子鑒定，并研究其系統(tǒng)發(fā)育是十分有價值的。
