王大會 西北農(nóng)林科技大學(xué)
1 豬腸道益生菌的分布
動物胚胎期的腸道是無菌的，從分娩到體外環(huán)境的幾個小時之內(nèi)，龐大的微生物群落迅速在腸道中形成。細(xì)菌在腸道的定植順序依次是需氧菌、兼性厭氧菌和專性厭氧菌，其原因主要在于需氧茵和兼性厭氧菌能夠消耗周圍環(huán)境中的氧氣，為專性厭氧菌的生存和定植提供條件。所以通常在仔豬出生后 24 h 左右，空腸、回腸、盲腸和直腸內(nèi)就分別出現(xiàn)并定居了雙歧桿菌、大腸桿菌、乳酸桿菌、消化球菌等，到 8~22天時這些細(xì)菌成為優(yōu)勢菌。乳酸菌是豬腸道內(nèi)極為重要的厭氧菌群，無毒、無副作用，擔(dān)負(fù)著豬體重要的生理功能。其中，乳酸桿菌屬、雙歧桿菌屬、腸球菌屬與豬體關(guān)系最密切，是豬腸道中的優(yōu)勢菌群。在乳酸菌中，乳酸桿菌屬與動物關(guān)系最密切，它是動物腸道中占優(yōu)勢的菌群之一。乳酸桿菌分布廣泛，動物從口腔到直腸始終有該菌存在。雙歧桿菌為豬腸道內(nèi)的正常寄生菌，且在豬的回腸與盲腸中定植較多。腸球菌是腸道中的正常菌群，從動物出生后即在腸道中定居，從十二指腸到結(jié)腸，隨腸段后移而逐漸增加。
2 益生菌菌種的選擇標(biāo)準(zhǔn)
益生菌在保障人畜健康或防治某些疾病方面發(fā)揮著越來越重要的作用，篩選不同來源和具有特殊功能的益生菌菌種成為國內(nèi)外研究的熱點。益生菌篩選標(biāo)準(zhǔn)的依據(jù)是它所具有的生理和功能特征。
第一有黏附特性。益生菌在腸道內(nèi)的黏附定植是其發(fā)揮生理作用的前提和基礎(chǔ)。益生菌進(jìn)入胃腸道后，首先和腸黏膜表面相接觸，并與黏膜表面的黏附素受體結(jié)合而發(fā)生黏附。這種黏附是益生菌實現(xiàn)其益生功能的第一步。通過競爭性的占位定植，可以在宿主腸黏膜層形成生物屏障，從而阻止病原菌與腸黏膜受體的結(jié)合；另外，粘附定植有利于延長益生菌對宿主胃腸道免疫系統(tǒng)和微生態(tài)區(qū)系平衡的調(diào)節(jié)的時間，提高其生理作用的效率。所以，評價和篩選益生菌的黏附性能，是衡量益生菌活菌制劑質(zhì)量優(yōu)劣的一個重要內(nèi)容。
第二有存活特性。能耐受胃腸道內(nèi)環(huán)境，在上皮細(xì)胞靶點上存活、繁殖并具有代謝活性等，是益生菌發(fā)揮益生作用的先決性條件。存活特性可以通過對益生菌對宿主胃腸道中高膽鹽、低pH和各種消化液(胃液，胰液)環(huán)境的耐受性來體現(xiàn)。
第三有功能性。益生菌在體內(nèi)能對致病菌起抑制作用或產(chǎn)生抗菌物質(zhì)，這是益生菌調(diào)節(jié)胃腸道微生態(tài)平衡，使宿主胃腸道保持健康狀態(tài)，不受病原菌侵襲的原因所在。
第四能增強免疫功能。益生菌可以通過刺激宿主腸道的免疫應(yīng)答，提高宿主免疫力來維持健康的微生態(tài)區(qū)系平衡狀態(tài)。
第五是臨床功效性。每一種益生菌都應(yīng)具有一種或多種益生特性，并能在臨床上得到驗證，這是益生菌應(yīng)用價值的體現(xiàn)。
最后，益生菌種還應(yīng)具備可加工性。能在生產(chǎn)工藝流程中持久的保持活力和生物學(xué)功能特性是開發(fā)應(yīng)用益生菌活菌制劑的關(guān)鍵。
3 16S rDNA 序列分析技術(shù)在細(xì)菌鑒定中的應(yīng)用
細(xì)菌的分類和鑒定經(jīng)過了漫長的研究階段。傳統(tǒng)上，細(xì)菌主要依靠培養(yǎng)和生化等表型特征進(jìn)行分類鑒定，這就是表型分類法，該方法技術(shù)難度低，工作量大，但試驗成本較低，是早期研究者首選的細(xì)菌鑒定方法。近年來，隨著分子生物學(xué)發(fā)展迅速，特別是PCR技術(shù)應(yīng)用以來，細(xì)菌的分類鑒定開始進(jìn)入分子水平，各種基因型分類方法也應(yīng)運而生，如(G+ C)mo l%、DNA 雜交、rDNA 指紋圖、質(zhì)粒圖譜和16Sr DNA等。其中，16SrDNA序列分析已經(jīng)成為細(xì)菌種屬鑒定和分類的標(biāo)準(zhǔn)方法，現(xiàn)在已經(jīng)報道的16S rDNA 全序列有2500多個種，各種屬的系統(tǒng)發(fā)育樹也已構(gòu)建，這為大部分細(xì)菌的分類鑒定提供了充足的數(shù)據(jù)。但16S rDNA 序列在原核生物中高度保守， 所以對于相近種或同一種內(nèi)的不同菌株鑒別分辨力較差。
